SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳资料.pptx

SDS-聚丙烯酰胺 凝胶电泳测定蛋白 质的相对分子质量;实验原理;聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)：;聚丙烯酰胺凝胶的特性： ;不连续的凝胶电泳;浓缩效应可显著提高聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨率，该效应可通过引入浓 缩胶和不连续缓冲溶液系统而获得。;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳; 当蛋白质的分子量在15～200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对 数呈直线关系，符合下列方程式;实验仪器设备;电泳仪：;移液器：;实验试剂;分离胶和浓缩胶;实验操作;制备凝胶板;制分离胶：首先在小烧杯中配制分离胶，将配好??分离胶 溶液用带蓝色枪头的移液枪从凝胶板一端缓慢加入两玻璃 板之间之间的空隙，直至液面达到标记处。然后贴近胶液 界面小心而缓慢地覆盖厚度约3～5mm的水层，以防止溶液 蒸发并保证液面平整。静置聚合30～60min，凝胶聚合好的 标志是胶与水层之间形成清晰的界面。;电泳;电泳：加样完毕，将电泳仪主体放入电泳槽中，加入电极 缓冲溶液(高过短板)，电盖上盖子，将电泳仪的正负极与电 泳仪正负极连接，打开电泳仪电源开关，开始时调节电流 为10 mA/块，待样品进入分离胶后，将电流调至20 mA /块， 电压恒定在80～100V，整个电泳保持电流强度恒定。当溴 酚蓝染料距分离胶底部1 cm时，停止电泳，关闭电源。;染色与脱色;结果;标准蛋白;做标准曲线 ;样品蛋白相对分子质量的确定：