感染性疾病的分子诊断精品课件教学课件.ppt

第八、九章感染性疾病的分子诊断  感染的慨念 感染是病原体和人体之间的相互作用过程 病原微生物：致病菌（条件致病菌） 微 生 物 人 体 微 生 物 人 体 不 同 的 感 染 状 态 共 生 状 态 在正常情况下，人体的一些腔道和体表均有微生物寄生 感染性疾病：由某种病原体所致，通过不同方式引起人体发生感染并出现临床症状的疾病。 病原体：病毒、细菌、原虫、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、寄生虫 。 常规检测方法： 免疫学方法 微生物学方法 受敏感性、特异性限制，不易早期诊断，并且不易提供病原体分型及耐药性方面的信息。 感染性疾病的分子诊断策略 一般性策略（检出病原体）： 判断有无感染 是何种病原体感染 常用方法：PCR ＋ 杂交 完整性策略： 检出病原体 分型（分类）－亚型－耐药性 常用方法：杂交、PCR、基因芯片、DNA测序 感染性疾病分子诊断标志物 病原体核酸分子（DNA/RNA） 基因表达产物 代谢物 免疫应答分子 二、感染性疾病分子诊断的常用方法 根据目的基因是否被放大， 可分为杂交法和扩增法。 信号放大技术检测方法 靶分子数目不变，而检测的探针信号放大 采用多酶、多探针或二者结合等方法来增加探针标志物的浓度使检测信号得到放大。 靶分子扩增技术检测方法 靶分子（RNA、DNA或探针）的扩增 PCR、替代扩增、LCR等 图8-3 NASBA原理示意图 引物A 5’端带有T7RNA聚合酶结合位点，3’端碱基与靶RNA 3’端序列互补;引物B的碱基序列与cDNA 3’端序列互补 nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器，不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制，循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR，特异性好。　 9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2021-7-112021-7-11Sunday, July 11, 2021 10、低头要有勇气，抬头要有低气。2021-7-112021-7-112021-7-117/11/2021 10:31:54 AM 11、人总是珍惜为得到。2021-7-112021-7-112021-7-11Jul-2111-Jul-21 12、人乱于心，不宽余请。2021-7-112021-7-112021-7-11Sunday, July 11, 2021 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2021-7-112021-7-112021-7-112021-7-117/11/2021 14、抱最大的希望，作最大的努力。2021年7月11日星期日2021-7-112021-7-112021-7-11 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。2021年7月2021-7-112021-7-112021-7-117/11/2021 16、业余生活要有意义，不要越轨。2021-7-112021-7-11July 11, 2021 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2021-7-112021-7-112021-7-112021-7-11 图8-3 NASBA原理示意图 引物A 5’端带有T7RNA聚合酶结合位点，3’端碱基与靶RNA 3’端序列互补;引物B的碱基序列与cDNA 3’端序列互补 nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器，不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制，循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR，特异性好。　 三、感染性疾病分子诊断的标本处理 标本采集处理主要包括选择合适的标本种类、标本量、抗凝剂等及对标本进行合适的传送、保存和预处理。 四、感染性疾病分子诊断的结果解释 1. 阴性结果 假阴性可能性 方法的灵敏度太低 方法失败 目标分子 2. 阳性结果 假阳性可能性 方法的特异性 受到污染 3. 定性检测结果 有时不能提供病原体活力相关信息 临床治疗病情缓解后一定时间内，在患者样本中仍可以检测出相应的病原体。 有些病原体潜伏在进体内，没有临床症状。 4. 疾病状况的判断 检测出病原体的存在并不能说此病原体就是引起疾病的直接原因。 该病原体可能是一种正常菌群 五、感染性疾病分子诊断的临床应用及评价 用于感染性疾病治疗的监控和预测、病情发展过程的危险性评价及疾病预后等。 耐药性的检测 细菌的分型 流行病调查 第一节 病毒的基因检测 人类许多感染疾病由病毒引起，如病毒