高效液相色谱法习题答案.pdf

第二十章 高效液相色谱法 思考题和习题 1． 简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。 相同点：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测 不同点： 分析对象及范围 流动相的选择 操作条件 流动相为有限的几种 “惰 能气化、热稳定性好、且沸 GC 性 ”气体，只起运载作用，对 加温常压操作 点较低的样品， 占有机物的 20% 组分作用小 溶解后能制成溶液的样品， 流动相为液体或各种液 高沸点、高分子量、难气化、离 体的混合。 它除了起运载作用 HPLC 室温、高压下进行 子型的稳定或不稳定化合物， 占外，还可通过溶剂来控制和改 有机物的 80% 进分离。 2 ．何谓化学键合相？常用的化学键合相有哪几种类型？分别用于哪些液相色谱法中？ 采用化学反应的方法将固定液键合在载体表面上， 所形成的填料称为化学键合相。 优点是使用过 程不流失，化学性能稳定，热稳定性好，适于作梯度淋洗。 目前常用的 Si-O-Si-C 型键合相，按极性分为非极性，中等极性与极性三类。①非极性键合相： 常见如 ODS 键合相，既有分配又有吸附作用，用途非常广泛，用于分析非极性或弱极性化合物；② 中等圾性键合相：常见的有醚基键合相，这种键合相可作正相或反相色谱的固定相，视流动相的极性 而定：③极性键合相：常用氨基、氰基键合相，用作正相色谱的固定相，氨基键合相还是分离糖类最 常用的固定相。 3 ．什么叫正相色谱？什么叫反相色谱？各适用于分离哪些化合物？ 正相色谱法： 流动相极性小于固定相极性的色谱法。 用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子 型物质，用于含有不同官能团物质的分离。 反相色谱法：流动相极性大于固定相极性的色谱法。用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。 4 ．简述反相键合相色谱法的分离机制。 典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。固定相，常用十八烷 基（ ODS 或 C18 ）键合相；流动相常用甲醇 -水或乙腈 -水。非典型反相色谱系统，用弱极性或中等极 性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。 反相键合相表面具有非极性烷基官能团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅 醇基的多寡，视覆盖率而定。对于反相色谱的分离机制 目前，保留机制还没有一致的看法，大致有 两种观点，一种认为属于分配色谱，另一种认为属于吸附色谱。分配色谱的作用机制是假设混合溶剂 （水十有机溶剂） 中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面， 组分分子在流动相中与被非极 性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。 吸附色谱的作用机制可用疏溶剂理论来解释。 这种理论把非 极性的烷基键合相，看作是在硅胶表面上覆盖了一层键合的十八烷基的 分子毛 ，这种 分子毛 有强 的疏水特性。当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来分离有机化合物时，一方面，非极性组 分分子或组分分子的非极性部分，由于疏溶剂作用，将会从水中被＂挤＂出来，与固定相上的疏水烷 基之间产生缔合作用，其结果使组分分子在固定相得到保留。另一方面，被分离物的极性部分受到极 性流动相的作用，使它离开固定相，减小保留值，此即解缔过程，显然，这两种作用力之差，决定了 分子在色谱中的保留行为。 一般说来， 固定相上的烷基配合基或被分离分子中非极性部分的表面积越