观察DNA和RNA在细胞中分布的实验原理.pdf

观察 DNA 和 RNA 在细胞中分布的实验原理： 1．甲基绿和吡罗红两种染色剂对 DNA 和 RNA 的亲和力不同，甲基绿使 DNA 呈现绿色，吡罗红使 RNA 呈现红色。 利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示 DNA 和 RNA 在细胞中的分布。 2 ．盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的 DNA 和蛋白质分离，有利于 DNA 与染 色剂结合。 ;② 30 ℃水浴保温 5min, 作用为配合盐酸水解 ,盐酸浓度 ,水浴温度和保温时间都会影响水解效果 ,如水解度 过低会影响后面染色效果 ,解度过高则会严重破坏细胞结构 ,干扰 DNA 和 RNA 观察 ;盐酸水解的作用是 加速 和 有利 于, 该步骤可以省略 ,但会增加染色环节时间 . 水解当中，主要是质量分数为 8% 的盐酸起作用。 盐酸的作用： 1.使染色体中的蛋白质和 DNA 分离，易于染色（主） 。 2. 使细胞膜的通透性改变，染色剂更易进入细胞，进而加快 染色速度。 烘干的作用：利于细胞贴在载玻片上，而不至于在水解和冲洗装片的过程 中滑入溶液中（杀死细胞并不是烘干的本质意图） 。 一、问题研究 1、原理与解析 (1)真核细胞的 DNA 主要分布在细胞核内， RNA 主要分布在细胞质中。 (2) 甲基绿和吡罗红两种染色剂对 DNA 和 RNA 的亲和力不同，甲基绿对 DNA 亲和力强，使 DNA 显现出绿色，而吡 罗红对 RNA 的亲和力强，使 RNA 呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示 DNA 和 RNA 在细胞中的分布。 (3)盐酸的作用 ① 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输； ② 盐酸使染色体中的 DNA 与蛋白质分离，便于 DNA 与染色剂的结合。 注意事项 1.材料的选择 ① 选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察； ② 常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞 ( 为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞 ) 2. 取材要点 ① 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质； ② 取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。 3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。 4. 安全要点 ① 用酒精灯烘烤载玻片时， 不要只集中于材料处， 而应将载玻片在火焰上来回移动， 使载玻片均匀受热， 以免破裂； ② 烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却 1 分钟。 5. 换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。 主要步骤 (以观察口腔上皮细胞为例 ) 1.取材 ① 滴： 在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为 0.9% 的 NaCl 溶液； ② 刮： 用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下； ③ 涂： 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中； ④ 烘： 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。 2. 水解 ① 解： 将烘干的载玻片放入装有 30ml 质量分数为 8% 的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解； ② 保： 将小烧杯放入装有 30 ℃温水的大烧杯中保温 5 分钟。 3.冲洗涂片 ① 冲： 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片 10 秒钟； ② 吸： 用吸水纸吸去载玻片上的水分。 4. 染色 ① 染：用 2 滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色 5 分钟； ② 吸： 吸去多余染色剂； ③ 盖： 盖上盖玻片。 5.观察 ① 低： 在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰； ② 高： 转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。