12基因工程的基本操作程序(修改).pptx

1.2 基因工程的基本操作程序;;编码区;①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质的序列。;;真核细胞的 基因结构;;1.2基因工程的基本操作程序;一、目的基因的获取; 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库;;cDNA( 互补DNA)： 是用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA（也叫 cDNA）片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库 ;提取某种生物的全部DNA;某种生物的单链mRNA; 文库类型;;依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性;寻根问底—— 为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？;（二）利用PCR扩增目的基因;(二)利用PCR技术扩增;(二)利用PCR技术扩增;⑥过程：;;DNA合成方向总是从子链的5′端→3′端延伸;PCR技术扩增与DNA复制的比较;;反转录法;1、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ ;1.作用：;①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。;寻根问底：将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？;思考与探究：1.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？;3、将目的基因导入受体细胞;1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点：;目的基因;④优点：;思考与探究：2.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分析出不能导入单子叶植物的原因吗?若将一个抗病基因导入小麦中,理论上讲你应该怎样做?;（2）基因枪法：;（3）花粉管通道法：;2.将目的基因导入动物细胞;①原核生物特点：;通过标记基因，进行筛选和检测;4、目的基因的检测与鉴定;DNA分子杂交示意图 ;1.检测;;;;　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。; 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。;;;3.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？;（1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA） （2）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子和终止子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 （3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。 （4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取β-珠蛋白。;1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来;2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA;3）有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶;4）有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制