双水相萃取详细资料.pptx

;（一）两水相的形成 （二）相图 （三）分配理论 （四）影响分配的参数 （五）应用 ;常用的溶液萃取法能用来提取生物大分子如蛋白质吗？;Reason;双水相体系简介;双水相系统;葡聚糖（Dextran）与聚乙二醇（PEG）按一定比例与水混合，溶液混浊，静置平衡后，分成互不相溶的两相，上相富含PEG、下相富含葡聚糖，见下图 ;;（一）两水相的形成;作用力为斥力：形成两个水相，两种高聚物分别富集于上、下两相。 作用力为引力：也形成两个水相，但两种高聚物都分配于一相，另一相几乎为溶剂。 作用力没有强烈的引力或斥力：完全互溶，形成均相的高聚物水溶液 聚合物的不相容性：两种聚合物分子间存在斥力，在达到平衡后，分成两相，两种聚合物分别进入到一相中。 ;;;双水相萃取:;（二）相图;;系线的长度是衡量两相间差别的尺度，系线越长两相间的差别越大，反之越小。 当系线向下移动时，长度逐渐减小，这说明两相的差别减小，当达到K点时，系线的长度为0，两相间差别消失，点s成为临界点。; （三）分配理论;当物质进入双水体系后，由于表面性质/电荷作用和各种力（如憎水键/氢键和离子键）的存在和环境的影响，物质在上相和下相间进行选择性分配，;（四）影响物质分配平衡的因素;当聚合物相对分子质量降低时，蛋白质易分配于富含该聚合物的相中。 例如：PEG/DX系统中当PEG的分子量降低时，会使蛋白质易分配于富含该PEG的相中，使分配系数增大，而葡聚糖的分子量减小，会使分配系数降低，这是一条普遍规律;这是因为成相聚合物的疏水性对酶等亲水性物质的分配产生较大的影响。 同一聚合物的疏水性随分子量的增大而增大，当PEG的分子量增加是，在质量浓度不变的情况下，其两端羟基数减少，疏水性增加，亲水性的蛋白质不再向富含PEG相中聚集，而转向另一相。 那么，分子量降低时，蛋白质就易分配于富含PEG的相了;当接近临界点时，上相和下相的组成相同蛋白质均匀的分配于两相中，分配系数接近于1。 当成相系统的总浓度增大时，系统远离临界点，系线长度增加，两相性质的差别增大，蛋白质分子的分配系数（分配系数为一常数只取决于被分离物质本身的性质和特定的双水相体系，与蛋白质的浓度无关。）就会偏离临界点的值（=1），即大于1或小于1。;在双水相聚合物系统中，加入电解质，首先阴阳离子会有不同的分配。 盐的正负离子在两相间的分配系数不同，由于各相应保持电中性，因而在两相中形成电位差，这对带电生物大分子的分配，产生很大的影响。;K-＞1 分配在上相 K+≈1 分配在下相;在pH6.9时溶菌酶带正电，卵蛋白带负电。当加入NaCl时，其浓度低于50mmol/L时可见上相电位低于下相电位，使溶菌酶分配在上相，从而分配系数增大。 而卵蛋白的分配系数减小，。;pH值对分配的影响源于两个方面的原因： （一）pH值会影响蛋白质中可以解离基团的解离度，因而改变蛋白质所带的电荷和分配系数。 ;（二）pH值会影响磷酸盐的解离程度，改变H2PO4-和HPO42-之间的比例，而影响分配系数。 pH的微小变化会使蛋白质的分配系数改变2～3个数量级。 ;温度影响相图，特别在临界点附近，因而也影响分配系数， 温度越高发生相分离所需的高聚物浓度越高;应用;双水相萃取系统的优点;工艺方面;合理调整双水相组成，从实用角度看，碎片分配在下相的好处多;Y= ×100%; 实验证明，在大多数场合下，收率Y都能达到90%；分配系数在2~20之间，多数场合大于3；很多杂蛋白也能同时除去。; PEG系统中细胞碎片分配到下相中较容易 分配在上相中的蛋白质可通过加入适量的盐（有时也可加入适量的PEG），尽兴第二次双水相萃取，以除去多糖和核酸，它们的亲水相较强因而容易分配在盐相中，而蛋白质就留在了PEG相中；在第三步萃取中，应该使蛋白质分配在盐相中（例如：调节pH），以使和主体PEG分离。色素由于其疏水性，通常分配在上相。主体PEG可循环使用，而盐相蛋白质则可用超滤方法去除残余的PEG以提高产品的纯度。;三步两水相萃取酶的流程：;杂蛋白 +盐;小分子分离和纯化;双水相萃取技术的进展;双水相萃取技术同其他分离技术相结合;亲和分配;两水相生物转化;9、要学生做的事，教职员躬亲共做；要学生学的知识，教职员躬亲共学；要学生守的规则，教职员躬亲共守。7月-217月-21Wednesday, July 21, 2021 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。15:00:1315:00:1315:007/21/2021 3:00:13 PM 11、一个好的教师，是一个懂得心理学和