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化妆品防腐效能评价方法
1．定义
微生物挑战性实验：将一定量的微生物加入到化妆品中，每隔一定时间检测微生物增减的数量，以此来判断防腐剂防腐效能的实验方法。
2．仪器设备
2.1 生物安全柜
2.2 高压蒸汽灭菌器
2.3 冰箱
2.4 恒温培养箱
2.5 均质器
2.6天平
3.试剂和培养基
3.1 0.85%生理盐水
3.2 含0.05%吐温80的生理盐水
3.3 改良的 LETHEEN 肉汤
3.4水解大豆琼脂培养基（TSA）
3.5萨布罗右旋糖琼脂培养基(SDA)
4.实验菌株
4.1细菌：金黄色葡萄球菌ATCC6538，大肠杆菌ATCC8739，铜绿色假单胞菌ATCC9027等。
4.2真菌：巴西曲霉ATCC16404，白假丝酵母ATCC10231等。
根据实际情况可增加其他细菌作为测试菌株。
5.实验方法（混合培养法）
5.1样品准备：取包装完好的待测化妆品样品2份，在无菌条件下各称取30g于灭菌试剂瓶中，备用。
5.2细菌悬浊液的制备：使用灭菌生理盐水制备测试菌株的菌悬液，浓度均为108cfu/mL。取每种测试菌株菌悬液等体积混合，备用。
5.3真菌悬浊液的制备：使用灭菌生理盐水制备白色假丝酵母菌悬液，使用含0.05%吐温80的灭菌生理盐水制备巴西曲霉孢子悬液，浓度均为108cfu/mL。取每种测试菌株菌悬液等体积混合，备用。
5.4菌液接种及样品检测：取上述称量好的化妆品（30g），分别加入0.3mL混合细菌悬浊液和0.3mL混合真菌悬浊液，用旋涡振荡器混合均匀，将样品于室温（22.5+2.5℃）保存。分别于0、1、7、14、21、28天检测化妆品中的菌落数，即取1g或1mL待测样品加入到9mL改良的LETHEEN肉汤中，充分混匀稀释成适宜的倍数，检测样品中菌落数。细菌培养推荐采用TSA培养基，36℃±1℃培养48h计数；白色假丝酵母和巴西曲霉培养推荐采用SDA培养基，28℃±2℃培养3-5天计数。每次检测做两个平行样。
5.5结果计数：按《规范》中菌落计数方法进行计数。
5.6评价方法
（A0-An）
（A0-An）
A0
式中：
A0──为初始加入微生物时化妆品中微生物的含量，单位为cfu/g或cfu/mL；
An──为不同检测时间化妆品中微生物的含量，单位为cfu/g或cfu/mL。
根据不同检测时间菌落数下降的百分数评价化妆品的防腐效果。
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