DNA重组技术基本工具课件.pptx

第一节 DNA重组技术的基本工具;基因工程的概念：;（一）基因工程的概念;;;;1. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀”;;;什么叫黏性末端？;要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？;;;;;;;双基练习：;两个____之间的_____ . (3) DNA末端:限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式:______和_______. 2. DNA连接酶----”分子缝合针” (1)作用:将双链DNA____,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的______. (2)种类: ①E.coli DNA连接酶:只能缝合DNA的_____ ②T4 DNA连接酶:既可缝合DNA的_____,又可缝合双链DNA的_______.; 3.基因进入受体细胞的载体----”分子运输车” (1)载体的种类 ①质粒:是一种裸露的,结构简单,独立于细菌染色体之外,并能够自我_____能力的双链______ DNA 分子;②______的衍生物;③________. (2)载体的特点 ①能够在细胞内_______;②有一个或多个____切割位点,便于供源DNA的插入. ③具有_____基因,供重组DNA的鉴定和选择.;基因工程培育抗虫棉的简要过程：;基因工程培育抗虫棉的关键步骤：;解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？;一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶;识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。; 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶EcoRΙ能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。;;什么叫黏性末端？;什么叫平末端？;动手操作吧！; 2、 “分子缝合针” ——DNA连接酶; 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否一样呢？;3、基因进入受体细胞的工具;作为运载体的必要条件;质粒;质粒的特点; 原核生物很容易受到自然界中外源DNA的入侵， 但是长期的进化过程中，这些原核生物却没有因为 外源DNA的入侵而灭绝。 根据我们刚刚掌握的知识，你能推测这其中的 原因吗？;;随堂练习：;2. （双选）有关基因工程的叙述中，错误的是 A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传 性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基??须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体;3.下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是 A．①② B．②③ C．③④ D．②④;2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。;;;;;;;;;1. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀”;;;什么叫黏性末端？;要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？;;;;;;;;;;;;;;课堂小结：;两个核苷酸之间的磷酸二酯键. (3) DNA末端:限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式:黏性末端和平末端。 2. DNA连接酶----”分子缝合针” (1)作用:将双链DNA片段“缝合”,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键. (2)种类: ①E.coli DNA连接酶:只能缝合DNA的黏性末端。 ②T4 DNA连接酶:既可缝合DNA的黏性末端,又可缝合双链DNA的平末端.; 3.基因进入受体细胞的载体----”分子运输车” (1)载体的种类 ①质粒:是一种裸露的,结构简单,独立于细菌拟核之外,并能够自我复制能力的双链环状DNA 分子;②λ噬菌体的衍生物;③动植物的病毒. (2)载体的特点： ①能够在细胞内自我复制;②有一个或多个限制酶切割位点,便于供源DNA的插入. ③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择.;;;;;