新冠病毒核酸检测注意事项和生物安全要求.pptx

新冠病毒核酸检测注意事项 及生物安全要求刘洋南昌大学第一附属医院内容目录新型冠状病毒 生物学特性实验室设置 与安全防护新冠病毒核 酸检测新冠核酸检 测注意事项新冠病毒生物学特性冠状病毒：单股正链RNA病毒δα夜莺冠状病毒 HKU11鹅口疮冠状病毒 HKU12229E NL63γβ鸡传染性支气管炎病毒IBV 白鲸冠状病毒SW1OC43 HKU1 MERS-CoV SARS-CoVSARS-CoV-2感染人类冠状病毒新冠病毒结构特性Orf1a/b基因编码非结构蛋白RNA聚 合酶复合体S定位于病毒颗粒表面的刺突糖蛋白E包膜蛋白、M 膜糖蛋白N定位于冠状病毒内部的核衣壳蛋白新冠病毒基因组有29903bp， 为多顺反子结构，主要基因 排列顺序为5-Orf1a/b-S-E-M-N-3，包涵5端甲基化帽子和 3 端 Poly A 尾，与真核生 物mRNA结构类似。S蛋白特异性识别血管紧张素转换酶2（ ACE2），介导病毒-宿主细胞膜融合，利 用宿主细胞进行5’端的Orf1a/b基因翻译， 生成RNA聚合酶复合体，以病毒基因组生 成负链，紧接着以负链生成基因组正链 RNA，实现病毒基因组复制。3’端结构性及辅助性蛋白通过不连续转 录方式，产生5负链亚基因组RNA（ sgRNA），合成3套叠正链sgRNA，翻 译成蛋白。病毒组装，囊泡运至胞膜， 胞吐释放至胞外新冠病毒传染特性01S蛋白与ACE2结合进入细胞。 ACE2是新冠病毒初次感染的限制因子。鼻腔杯状细胞和纤毛细胞ACE2表达水平最高 鼻拭子的病毒载量显著高于咽拭子0203 SARS-CoV-2平衡解离常数（Kd）是15nM传染特性SARS-CoVKd是325.8nM，亲和力相差10-20倍在出现症状的头5天里，新冠病毒可在咽 部活跃复制，传播活跃。04蝙蝠-中间宿主-人传播、飞沫传播、气溶胶 传播、接触传播、血液传播？05强、广、久在症状完全消失3周之后依旧可以检测出 新冠病毒的RNA。06新冠病毒生存特性病毒 宿主病毒 生存病毒 灭活空气、气溶胶—3小时纸质材料—24 小时铜表面—4小时塑料和不锈钢 表面—2-3天。原理是破坏蛋白质膜；对热敏感，56 ℃30 分钟、乙醚、75%酒 精、含氯消毒剂、过 氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒。氯已定不能有效灭活 病毒。自然宿主：最 有可能是中华 菊头蝠中间宿主：可 能是蛇、穿ft 甲、龟类;最终宿主：实验室的设置与安全防护世界卫生组织发布《新冠病毒实验室安全指南》新冠病毒已纳 入《中华人民 共和国传染病 防治法》中乙 类传染病，采 取甲类传染病 的预防、控制 措施检验医学会（第一版）《2019新型冠状病毒相关实 验室检测的生物安全指南》实验室操作“ 零感染”国家卫健委第二版《新型冠状病毒实验室生物 安全指南》实验室的设置典型PCR 实验室工艺平面图全新风系统—新风经热湿处理及三级(初效+中效+高效/亚高效)过滤后送入室内， 各房间排风口单独设置高效或亚高效过滤器。加强型生物安全二级实验室（P2+）在普通型生物安全二级实验室的基础上，机 械通风系统（新风系统）形成负压、压力差和气流走向（分子生物学实验室）。实验室辅助工作区(生物风险相对较小)、实验室防护区（生物风险相对较大）、核心工作间（污染区） 。个人防护等级25%一级生物安全防护医用外科口罩、乳胶手套、工作服、 医用防护帽，加手卫生二级生物安全防护医用防护口罩或N95口罩、乳胶手套、工作服外隔离衣、医用防护帽， 加手卫生。酌情可加护目镜。50%三级生物安全防护医用防护口罩或N95、双层乳胶手套、面屏、护目镜、工作服外防护 服、双层医用防护帽，加手卫生。 必要时双层口罩（外医用防护口罩， 内N95）。75%特殊防护三级防护基础上，双层防护服、双 层口罩（外医用防护口罩，内N95）、全面型呼吸防护器、三层乳胶 手套、双层医用防护帽等100%个人防护时机工作后防护要求75%酒精（或等效消 毒液）喷洒防护服按标准流程脱生物安 全防护装备，污染面 切勿接触内部衣物。洗手和手消毒。护目镜放入消毒液72%工作前防护要求采样及入实验室前，务 必三级生物安全防护一次性防护服、护目镜 或面罩、双层手套、N95 罩、帽子和防护靴套等。穿防护服顺序：戴帽子→戴 N95 口罩→戴内层 手套→穿防护服→穿防水鞋套→ 戴外层手套→戴护目镜或面屏。28%脱防护服顺序：摘护目镜或面屏→解开防护 服上的密封胶条→脱手套→ 脱防护服→脱防护靴套→口 罩→脱帽子。标本生物安全标本 采集病毒 源头标本 处理132有病毒的标本：呼吸 道标本（鼻咽拭子、咳痰、抽吸痰、BALF、 PSB等）、粪便标本、 血液标本。暂无证据有病毒的标 本：尿液、其他无菌 体液（脑脊液、心包 积液、腹腔积液等）、 腹膜透出液、精液、