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选修 3 易考学问点背诵
专题 1 基因工程
基因工程地概念
基因工程为指依据人们地愿望,进行严格地设计,通过 体外 DNA重组与转基因技术, 给予生物以 新地遗传特性 ,制造出 更符合人们需要地新地生物类型与生物产品 ;基因工程为在 DNA分子水平 上进行设计与施工地,又叫做 DNA重组技术 ;
(一)基因工程地基本工具
“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶(限制酶)
( 1)来源:主要为从 原核生物 中分别纯化出来地;
( 2)功能:能够识别双链 DNA分子地某种 特定 地核苷酸序列,并且使每一条链中 特定 部位地两个核苷酸之间地 磷酸二酯键 断开,因此具有 专一 性;
( 3)结果:经限制酶切割产生地 DNA片段末端通常有两种形式: 黏性末端 与平末端 ;
“分子缝合针”—— DNA连接酶
两种 DNA连接酶( E· coliDNA 连接酶与 T4- DNA连接酶)地比较:
①相同点:都缝合 磷酸二酯 键;
②区分: E· coliDNA 连接酶来源于 T4 噬菌体 ,只能将双链 DNA片段互补地 黏性末端 之间地磷酸二酯键连接起来;而 T4DNA连接酶能缝合 两种末端 ,但连接平末端地之间地效率较 低;
与 DNA聚合酶作用地异同 :DNA 聚合酶只能将 单个核苷酸 加到已有地核苷酸片段地末端,形成磷酸二酯键; DNA连接酶为连接 两个 DNA片段 地末端,形成磷酸二酯键;
“分子运输车”—— 载体
( 1)载体具备地条件:① 能在受体细胞中复制并稳固储存 ;
② 具有一至多个限制酶切点,供外源 DNA片段插入 ;
③ 具有标记基因,供重组 DNA地鉴定与挑选 ;
( 2)最常用地载体为 质粒 , 它为一种 暴露地,结构简洁地,独立于细菌染色体之外,并具有自我复制才能地双链环状 DNA分子 ;
( 3)其它载体: 噬菌体地衍生物,动植物病毒
( 二) 基因工程地基本操作程序
第一步: 目地基因地猎取
目地基由于指: 编码蛋白质地结构基因 ;
原核基因实行 直接分别 获得,真核基由于 人工合成 ;人工合成目地基因地常用方法有 反转录法 _与化学合成法 _;
PCR 技术扩增目地基因
( 1)原理: DNA双链复制
( 2)过程:第一步:加热至 90~ 95℃DNA解链 ;其次步:冷却到 55~60℃, 引物结合到互补 DNA链;第三步:加热至 70~75℃, 热稳固 DNA聚合酶从引物起始互补链地合成 ;其次步: 基因表达载体地构建
目地:使目地基因在受体细胞中 稳固存在 ,并且可以 遗传至下一代 ,使目地基因能够 表达与发挥作用 ;
组成: 目地基因 + 启动子 + 终止子 + 标记基因
( 1)启动子:为一段有特别结构地 DNA片段 ,位于基因地 首端,为 RNA聚合酶 识别与结合地部位,能驱动基因 转录出 mRN,A 最终获得所需地 蛋白质 ;
( 2)终止子:也为一段有特别结构地 DNA片段 ,位于基因地 尾端 ;
( 3)标记基因地作用:为为了鉴定受体细胞中 为否含有目地基因 ,从而将 含有目地基因地细胞 挑选出来;常用地标记基由于 抗生素基因 ;
第三步: 将目地基因导入受体细胞 _
转化地概念: 为目地基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维护稳固与表达地过程;
常用地转化方法:
将目地基因导入植物细胞:采纳最多地方法为 农杆菌转化法 ,其次仍有 基因枪法 与 花粉管通道法 等;
将目地基因导入动物细胞:最常用地方法为 显微注射技术 ;此方法地受体细胞多为 受精卵;
将目地基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞地缘由为 繁殖快,多为单细胞,遗
2+传物质相对较少 ,最常用地原核细胞为 大肠杆菌 ,其转化方法为: 先用 Ca 处理细胞, 使其成为 感受态细胞 ,再将 重组表达载体 DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合, 在肯定地温度下促进感受态细胞吸取 DNA分子,完成转化过程;
2+
重组细胞导入受体细胞后,挑选 含有基因表达载体受体细胞 地依据为 标记基由于否表达 ;第四步: 目地基因地检测与表达
第一要检测 转基因生物地染色体 DNA上为否插入了目地基因 ,方法为采纳 DNA 分子杂交技术 ;
其次仍要检测 目地基由于否转录出了 mRN,A 方法为采纳 用标记地目地基因作探针与
mRNA杂交 ;
最终检测 目地基由于否翻译成蛋白质 ,方法为从转基因生物中提取 蛋白质 ,用相应地抗体 进行抗原-抗体杂交 ;
有时仍需进行 个体生物学水平 地鉴定;如 转基因抗虫植物为否显现抗虫性状 ;
(三)基因工程地应用
植物基因工程: 抗虫,抗病,抗逆转基因植物,利用转基因改良植物地品质;
动物基因工程: 提高动物生长速度,改善畜产品品质,用转基因动物生产药物;
基因治疗: 把正常地外源基因导入病人体内,使该基因
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