微生物实验思考题参考答案及知识要点.docVIP

二. 细菌的简单染色和革兰氏染色 1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？ 革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。 2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？ 自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。 3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？ 能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。 4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？ a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。 固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。 三. 霉菌、放线菌的形态观察 1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？ 一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。 2. 显微镜下细菌 放线菌 酵母菌和霉菌的主要区别是什么？ 放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。 细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。（部分杆菌还可形成芽孢） 放线菌：存在分枝丝状体和菌丝体，革兰氏阳性菌，有孢子丝和孢子（球形、椭圆形、杆状、柱状）。 酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。菌体比细菌大几倍到几十倍，部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。 霉菌：菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍到几十倍，在低倍镜下即可看到，并还可看到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等。 四. 玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌 1. 高压蒸汽灭菌开始时为什么要将锅内排尽？灭菌后为什么要待压力降低到“0” 因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡（压力突然下降而发生复沸腾）而冲出烧瓶口或试管口，造成培养基等液体沾湿棉塞或溢出等事故。 2. 设计实验方案，比较干热灭菌和湿热灭菌的效果。 以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件和等量原则。 实验材料 试管 镊子 酒精灯 嗜热脂肪芽孢杆菌 ATCC 7053 菌片 纸片（与菌片同大小 同材料） 溴甲酚紫蛋白冻水培养基（已灭菌）等实验材料（材料有余）。 对照组 取9支洁净试管，分为A1 B1 C1 三组（每3支一组），将A1 组中放入菌片，B1 组中放入纸片，C1组中什么也不加；不经灭菌，直接加入溴甲酚紫蛋白冻水培养基（等量）。 恒为培养 将上述所有试管按分组在56℃ 3. 为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高 时间长？ 在湿热条件下，有水蒸汽的作用： a高温水蒸汽导热比干空气要快； b高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程； c高温水蒸汽能穿透细菌的细胞膜，直接进入细胞内破坏细胞； c高温水蒸汽能水解一部分细胞结构，加速导热。 （湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的穿透力比干热大；湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 五. 培养基的配置 1. 配制牛肉膏蛋白胨培养基，有哪些操作步骤？那几步易出错，如何防止？ 称取药品—加热溶化—分装—加棉塞—包扎—灭菌—搁置斜面 易出错的步骤有： a 称取药品 称取时钥匙专用，瓶盖不要错盖，易吸水的药品要快速称取； b 加热溶化 加入药品后要用玻璃棒不停搅拌，以免糊底（在琼脂熔化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器，同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。）； c 分装 分装时培养基不能粘在三角瓶（或试管）口，以免接种时染菌； d 搁置斜面 斜面长度约试管长度一半为宜。 2. 配制培养基的一般原则是什么？ a 目的明确b 营养协调c 理化适宜d 经济节约 六. 平板菌落计数法 1. 平板菌落计数法的原理是什么? 它适用于那些微生物的计数？ 平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定