细胞示踪技术与应用GF基本知识点.ppt

* 李京宝 2011.11.25 细胞示踪技术与应用 (green fluorescent protein ,GFP) * 主要内容 GFP GFP的研究历史 GFP的应用 学习要点 基本特性 机遇与重视 开阔视野 * GFP —— 基本性状 * 发光机制 生色基团附着于α-螺旋上，几乎完美的包被于桶状结构中心。 六肽组成的发光中心 发光团（三肽）Ser65-Tyr66-Gly67经过环化形成了对羟基苯咪唑啉酮。 自身催化环化的结果 有氧过程，O2使Tyr66脱氢氧化。 * 特点 GFP荧光极其稳定； 中度氧化剂对GFP荧光影响也不大； 灵敏度高,抗光漂白能力强； 荧光的产生不需要任何外源反应底物。 * GFP的研究历史 —— 从下村修到钱永健 * The Nobel Prize in Chemistry 2008 for the discovery and development of the green fluorescent protein, GFP Osamu Shimomura Martin Chalfie Roger Y. Tsien 钱永健 马丁·查尔菲 下村脩 2008年10月8日 * 下村脩（1928年8月27日－），有机化学家、海洋生物学家 1928年生于日本京都， 1960年获得日本名古屋大学有机化学博士学位 美国Woods Hole海洋生物学实验室（MBL） 波士顿大学医学院名誉退休教授 * 小海萤（Cypridina hilgendorfii） 1955, Nagoya University, laboratory of Prof.Yoshimasa Hirata. * Friday Harbor, 1961. Aequorea victoria Prof.Frank Johnson‘s Lab, Princeton, NJ, 1959 * Shimomura O, Johnson F, Saiga Y (1962). Extraction, purification and properties of aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan, Aequorea. J Cell Comp Physiol 59: 223–39 水母素aequorin GFP * 600 rings per hour （ 10 times more than by hand.） 30–40 bucketfuls of jellyfish each day. 1 mg of AF-350 150 mg of purified aequorin 50,000 jellyfish. 2004 * 1974年，纯化到了这个蛋白， 时称绿色蛋白、以后称绿色荧光蛋白GFP。 同年，荧光共振能量转移(FRET)在生物中发现 “荧光素——GFP ” 1979年，GFP的发色基团确定 酶解法 * 1992年，Douglas Prasher拿到了GFP的基因（Woods Hole海洋研究所） (Douglas Prashers) work was critical and essential for the work we did in our lab. They couldve easily given the prize to Douglas and the other two and left me out. ------Martin Chalfie Im really happy for them. I was really surprised that particular topic carried that much weight . ------Douglas Prasher * 马丁·查尔菲（Martin Chalfie，1947年－），美国科学家 成长于美国芝加哥 1977年获得美国哈佛大学神经生物学博士学位 1982年起任美国哥伦比亚大学生物学教授。 * Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W. W., and Prasher, D. C. (1994), “Green fluorescent protein as a marker for gene expression,” Science 263: 802–805. * 钱永健 Roger Yonchien Tsien （1952年2月1日－） 美国生物化学家 美国国家科学院院士 美国国家医学院院士 美国艺术与科学院