清洗消毒级培养基配制.ppt

第二章 清洗、消毒及培养基的配制;教学目的和要求：2学时;第一节 清洗与消毒;;2.1.1 玻璃器皿的清洗;1、浸泡;2、刷洗;3、浸酸;4、冲洗;2.1.2 胶塞的清洗;2.1.3 塑料制品的清洗;2.1.4 滤器的清洗;2.1.5 包装;2.2 消毒;2.2.1 物理灭菌法;消毒原理：破坏微生物的核酸和蛋白质等而 使其灭活（直接作用）。 紫外线产生的臭氧杀死微生物 （间接作用）。 消毒范围：距地面不超过2.5米，消毒物品不 能互相遮挡。超净台消毒灯距台 面距离不应超过1.5米 消毒时间：30min左右；;;2.湿热消毒 高压蒸汽消毒，最广泛，效果最好的消毒方法。 高压灭菌锅：培养基、工具等的灭菌 根据大小分为：小型、中型、大型 有全自动、手动之分。;培养基、器具等的灭菌 一般120℃，灭菌30分钟。 灭菌锅有自动和手动之分。 自动锅加足水后，调好时间、温度，即可自动运转。 手动锅加足水后，关好，通电。待压力升到0.5 kg/cm2时，打开排气阀排除锅内冷空气。然后关闭排气阀，升至1.1 kg/cm2 (120℃左右) 时计时, 用通电、断电来保持20分钟。待降至压力为0后取出。;手动灭菌锅;安全阀;全自动灭菌锅;清洗消毒级培养基配制;;3. 干热消毒 主要用来消毒玻璃器皿。 用电热烤箱将物品加热到160℃以上，并保持90～120min，以杀死细菌。 注意：不可骤冷。 灼烧也是干热消毒灭菌方法之一，快捷方便，通常金属器具和玻璃口缘。;清洗消毒级培养基配制;;过滤灭菌 培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇高温分解，就需要过滤灭菌或者二者结合。 另外酶等也需过滤灭菌。 灭菌方法：将激素或酶配成一定浓度，用注射器过滤，0.2-0.25μm。制培养基时，先将培养基高压灭菌，待降至50℃左右时，加入适量的激素，然后分装。;2.2.2 化学消毒法;2.3 培养基及其配制;1.无机营养成分 必需元素在体内的生理作用主要包括四个方面： 一是组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质； 二是构成一些特殊的生理活性物质，如植物激素、酶及酶的活化剂，参与植物代谢活动； 三是这些元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡???电荷平衡等生物电化学等方面的作用； 四是发育过程中，影响组织器官的建成。;2、有机营养成分 糖（蔗糖）： 糖在培养基中的作用： 1）.为细胞提供合成新物质的炭骨架。 2）.为细胞的呼吸代谢提供底物与能源。 3）.维持培养基的渗透压。 维生素：为使培养物生长的更好，可以根据培养目的添加一种或多种维生素：硫胺素（VB1）、烟酸(Vpp)、泛酸钙(VB5)、吡哆醇(VB6)、钴胺素(VB12)、叶酸(VBc)、抗坏血酸(VC)等。; 氨基酸：是蛋白质的组成成分。常用的是甘氨酸及多种氨基酸的混合物，如水解酪蛋白、水解乳蛋白等。 肌醇：又称环己六醇，在糖类的互相转化中起作用。根据培养植物不同，是否添加。 腺嘌呤：是合成各种细胞分裂素的前体之一，外源添加腺嘌呤有利于细胞自身合成细胞分裂素，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成和生长。;3、 琼脂 固化剂，使培养基凝固。 ;4、植物激素 自然界中，植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠、萌发等许多生理生化活动。 在组织培养中，培养基中各种成分对培养物影响最大、最显著的是激素。激素的种类、浓度以及配比会显著影响愈伤组织的形成、不定根、不定芽的分化，胚状体的形成等。;通常，不同植物，或不同品种，甚至同一植物的不同位置对激素的要求有很大变化。这主要决定于植物的内源激素水平 组织培养中使用的激素有的是天然的，如脱落酸（ABA）等，有的是合成的，如2,4-D等。;;1.?生长素类 自然界中，即内源生长素影响茎和茎节的伸长、向光性、顶端优势、叶片脱落和生根等现象。 在组织培养中，生长素被用来诱导细胞的分裂、愈伤组织形成和根的分化。;;2．细胞分裂素类(嘌呤族衍生物) 自然界中，细胞分裂素影响细胞分裂、顶端优势的变化和茎的分化等 组织培养中，细胞分裂素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。常用的细胞分裂素有： 激动素（呋喃氨基嘌呤、Kinetin、KT） 玉米素 (Zeatin、zt) 6-苄基嘌呤 (BAP) 异戊烯氨基嘌呤 (2-ip) 溶解方法：0.1 M HCl 保存：配