亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达论文.docVIP

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达论文 【摘要目的摘要：观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞系HBZY1表达p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的影响，从而探究硒在防治糖尿病肾病（DN）中的功能机制.方法摘要：分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终末产物（AGEs）刺激HBZY1细胞；先给予100nmol/L亚硒酸钠预处理后，再分别以上述4种刺激因素孵育HBZY1细胞，分别检测HBZY1细胞p38MAPK和MCP1的表达并比较.结果摘要：4种刺激因素均可作为独立因素，导致HBZY1细胞p38MAPK和MCP1表达量增加；亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的p38MAPK和MCP1的表达.结论摘要：亚硒酸钠通过抑制p38MAPK和MCP1在HBZY1细胞的表达,从而有效防治DN的发生发展，表明硒在DN的防治过程中发挥积极功能. 【亚硒酸钠；p38丝裂原活化蛋白激酶；单核细胞趋化蛋白1；系膜细胞；糖尿病肾病 【中图号R587.24 0引言 近年来国外探究表明单核细胞趋化蛋白1(monocytechemoattractantprotein1，MCP1)和糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）有密切关系［1］.p38MAPK是细胞信号传递的交汇点或共同通路［2-3］，但它在DN发生中的功能及其和MCP1关系仍不十分清楚；硒是机体必需微量元素之一，其缺乏可加剧DN的氧化应激，并可产生拟高血糖病理状态，从而加剧DN的发生发展［4］.但其是否功能于p38MAPK和MCP1国内外未见文献报道.我们分别给予高葡萄糖(HG)、高胰岛素(HI)、过氧化氢(H2O2)和糖基化终末产物(AGEs)孵育HBZY1细胞，观察HBZY1细胞p38MAPK和MCP1的表达以及亚硒酸钠对HBZY1细胞p38MAPK和MCP1表达的影响.从而明确二者在DN形成中的功能及硒在防治DN中的功能机制. 1材料和方法 1.1材料大鼠肾小球系膜细胞系（HBZY1，中国典型培养物保藏中心CCTCC）；新生牛血清、RPMI1640培养液、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG（二抗）（北京中山生物技术有限公司）；亚硒酸钠(KarolinskaInstitute赠予)；柱离心式总RNA抽提试剂盒、RTPCR两步法试剂盒、PCR相对分子量标准（TaKaRa公司）；PCR引物合成（上海博亚生物技术有限公司），蛋白质相对分子量标记物（BioRad公司）；磷酸化p38MAPK兔多抗（(Promega公司). 1.2方法 1.2.1细胞系HBZY1的培养HBZY1细胞常规培养于200mL/LRPMI1640培养液中，培养条件为37℃，饱和湿度50mL/LCO2，每2~3日用0.2g/L乙二胺四乙酸（EDTA）消化传代.HBZY1细胞长满培养瓶底40%后分为9组，以无血清培养液饥饿24h,然后按实验分组加入刺激（及干预）因素. 1.2.2体外制备AGEs参考文献［5］，按牛血清白蛋白（bovineserumalbumin,BSA）50g/L，和葡萄糖90g/L，0.5mmol/LEDTA及0.2mmol/LPBS（pH7.4）混匀后过滤除菌，37℃恒温培养箱卵孵育60d.0.1mol/LPBS（pH7.4）中透析48h，测定蛋白含量及荧光强度，分装后存于-80℃冰箱保存备用. 1.2.3实验分组分别以一定浓度HG,HI,H2O2和AGEs刺激细胞系HBZY1一定时间；先给予亚硒酸钠100nmol/L预处理HBZY1细胞48h后，再分别以上述4种刺激因素（浓度、时间同前）孵育HBZY1细胞，同时设对照组.分组情况如下摘要：①对照组摘要：用等体积PBS培养细胞;②HG组摘要：用25mmol/L葡萄糖刺激HBZY1细胞72h;③HI组摘要：用100nmol/L胰岛素刺激HBZY1细胞24h;④H2O2组摘要：用100μmol/LH2O2刺激HBZY1细胞1h;⑤AGEs组摘要：用100mg/LAGEs刺激HBZY1细胞6h;⑥亚硒酸钠+HG组摘要：依次以100nmol/L亚硒酸钠和25mmol/L葡萄糖分别刺激HBZY1细胞48h和72h;⑦亚硒酸钠+HI组摘要：依次以100nmol/L亚硒酸钠和100nmol/L胰岛素分别刺激HBZY1细胞48h和24h;⑧亚硒酸钠+H2O2组摘要：依次以100nmol/L亚硒酸钠和100μmol/LH2O2分别刺激HBZY1细胞48h和1h;⑨亚硒酸钠+AGEs组摘要：依次以100nmol/L亚硒酸钠和100mg/LAGEs分别刺激HBZY1细胞48h和6h. 1.2.4RTPCR法检测MCP