设计性实验报告植物可溶性蛋白质和糖含量的测定.pdf

. 设计性实验报告 题 目 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定 课程名称： 基础生物化学实验 实验学期： 2011 至 2012 学年 第 一 学 期 . . 植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定 摘要 本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了 可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。 结果表明： 生菜的蛋白质含量为 5.88 （mg/g），糖含量为 0.0739g/100g ； 苹果中蛋白质含量为 0.2926 （mg/g ），糖含量为 0.2126g/100g 。即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但 苹果中的糖含量更高。 关键词 可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝 G-250 染色法，蒽酮法，含量测定 1、材料与方法 1.1 蛋白质含量测定 标准蛋白质溶液 、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果 分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等 1.2 糖含量测定 200ug/ml 标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果 试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架 2、实验步骤 蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝 G-250 染色法） 2.1 标准曲线的绘制 取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入 5ml 考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放 置 5min 左右，以 0 号试管为空白对照，在 595nm下比色测定吸光度。以蛋白质含量为横坐 标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 管号 试剂 0 1 2 3 4 5 标准蛋白 0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 质（ ml ） 蒸馏水量 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0 （ml ） . . 蛋白质含 0 20 40 60 80 100 量（ ug ） 2.2 样品测定 2.2.1 样品提取 分别秤取生菜、苹果鲜样 0.25 ～0.5g ，用 5ml 蒸馏水或缓冲液研磨 成匀浆后， 3000r/min 离心 10min，上清液备用。 2.2.2 吸取样品提取液 1.0ml （蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入 5ml 考马斯 亮蓝试剂，摇匀，放置 2min 后在 595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白 质含量。 糖含量测定 2.3 . 葡萄糖标准曲线的制作 取 6 支 20ml 具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。 在每管中均加入 0.5ml 蒽酮试剂， 再缓慢地加入 5ml 浓 H2SO4 ，摇匀后， 打开试管塞， 置沸水浴中煮沸 10 分钟，取出冷却至室温，在 620nm波长下比色，测各管溶液的光密度 值（ OD），以标