《仪器分析》教学课件 第05章 毛细管电泳分析法 5.3 高效毛细管电泳分离模式.pptVIP

2021-8-23 第五章毛细管电泳 毛细管区带电泳 毛细管凝胶电泳 胶束电动毛细管色谱 毛细管等电聚焦 毛细管等速电泳 毛细管电渗色谱 第三节毛细管电泳别离模式 Capillary electrophoresis, CE Separate types of CE 2021-8-23 别离类型 八种别离类型，介绍常用的几种； 根据试样性质不同，采用不同的别离类型； 每种机理的选择性不同。 2021-8-23 毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE 带电粒子的迁移速率 = 电泳和电渗流速率的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出。 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响在阳离子后流出。 阴离子：两种效应的运动方向相反。v电渗流 v电泳时，阴离子在负极最后流出,在这种情况下，不但可以按类别离，同种类离子由于差速迁移被相互别离。 最根本、应用广的别离模式。 2021-8-23 毛细管凝胶电泳 Capillary gel electrophoresis ，CGE 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小别离。能够有效减小组分扩散，所得峰形锋利，别离效率高。 蛋白质、DNA等的荷/质比与分子大小无关，CZE模式很难别离，采用CGE能获得良好别离，DAN测序的重要手段。 特点：抗对流性好，散热性好，别离度极高。 无胶筛分技术：采用低黏度的线性聚合物溶液代替高黏度交联聚丙烯酰胺。柱廉价，易制备。 2021-8-23 1.缓冲溶液中参加离子型外表活性剂，其浓度到达临界浓度，形成一疏水内核，外部带负电的胶束。 5.3.3 胶束电动毛细管色谱〔MECC ，MEKC〕micellar electrokinetic capillary chromatography 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 2021-8-23 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且v电渗流 v电泳 ，负电胶束以较慢的速率向负极移动。 5.色谱与电泳别离模式的结合。 3.中性分子在胶束相和溶液〔水相〕间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长。 4.可用来别离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。 2021-8-23 1. 根据等电点差异别离生物大分子的高分辨率电泳技术。 2. 毛细管内充有两性电解质〔合成的具有不同等电点范围的脂肪族多氨基多羧酸混合物〕，当施加直流电压〔6～8V〕时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度。 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零。 毛细管等电聚焦 Capillary isoelectric focusing，CIEF 2021-8-23 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互别离。 5. 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液。 6. 加压将毛细管内别离后的溶液推出经过检测器检测。 7. 电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。 2021-8-23 1. 将两种淌度差异很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速率移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速率等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而别离。阴极进样，阳极检测。 毛细管等速电泳 Capillary isotachophoresis ，CITP 2021-8-23 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(v=μE )，淌度大的离子区带电场强度小。 沿出口到进口，将不同区带依次排序1,2,3,4 …， 电场强度依次增大。假设“2〞号中离子扩散到“3〞号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2〞区；当“2〞号中离子跑到“1〞号区，离子被减速使之归队。 4. 特点：界面明显，富集、浓缩作用。 2021-8-23 在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为别离机理的电动色谱过程； 毛细管电渗色谱 Capillary electroosmostic chromatography ，CEC 2021-8-23 请选择内容 结束 5.1 毛细管电泳的根本原理 5.2 高效毛细管电泳仪 5.3 毛细管电泳的别离模式 5.4 影响分辨率的