基因工程的基本操作程序.ppt

复习;;1．质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点 是： ( ) ①能自主复制　 ②不能自主复制　 ③结构很小 ④蛋白质　 ⑤环状RNA　 ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A．①③⑤⑦　B．②④⑥ C．①③⑥⑦　D．②③⑥⑦ ;;真核生物的基因结构;第二节基因工程的基本操作程序;（一）获得目的基因 （二）构建基因表达载体——形成重组DNA分子 （三）将目的基因导入受体细胞 （四）目的基因的检测与鉴定;用DNA合成仪人工合成; cDNA文库 基因组文库;鸟枪法：散弹射击法; 基因组DNA文库的构建 将总DNA经过酶解，分离不同长短的DNA片段。包含的基因组片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因组文库。;目的基因的mRNA;;;蛋白质氨基酸序列;聚合酶链式反应 （PCR：Polymerase Chain Reaction); ;PCR反应过程可分为三步：变性、退火、延伸;2．退火 引物与模板互补成双链。 （55～60℃） (由于引物浓度高，序列短，所以易与模板结合。);PCR反应过程可分为三步：变性、退火、延伸;变性;退火;延伸;㈡ PCR反应曲线;PCR仪程序设定;PCR的应用;实例 1：;（二）基因表达载体的构建—形成重组DNA分子;目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代，使目的基因表达和发挥作用。;目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。;常用的受体细胞：;导入微生物细胞;导入植物细胞：土壤农杆菌转化法;基 因 枪 法：单子叶植物常用的一种基因转化方法，但成本较高。; 将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： ;转基因动物;1.筛选含有目的基因的受体细胞;pBR322质粒结构;（2） DNA分子杂交——检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因;利用DNA分子杂交筛选含有目的基因的细菌克隆;DNA分子杂交示意图 ;2.检测目的基因的表达; （3）鉴定（个体生物学水平）：;;回答问题：;思考：