waters e2695高效液相色谱.ppt

主讲人：马贵红 日期：2010-07-17;什么是高效液相色谱法;定量分析主要基于与标准品的比较 是其最大应用领域 定性分析；不是色谱的强项 基于样品的保留时间比较 借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器 对定量及定性分析的要求 灵敏度、精度及准确度的要求 样品量的要求；复杂样品的分析能力 容易使用;高效液相色谱如何工作;检测器连接计算机数据站，高效液相色谱系统单元先记录电信号，再将电信号转换为色谱图，在显示屏上展现出来。 定性和定量样品内溶物浓度。 由于样品中化合物性质差异很大，几种类型的检测器被开发出来。 如果一个化合物能吸收紫外光，可使用紫外吸收检测器。 如果这个化合物发荧光，可使用荧光检测器。 如果该化合物没有上述性质之一，可使用更广泛的检测器，如蒸发光散射检测器[ELSD]。 最强大的方式是顺序使用多个检测器。例如，紫外和/或蒸发光检测器可和质谱仪[MS]联用来分析色谱分离的组分。这样，从一次进样，可得到分析物的更多综合的信息。将质谱与高效液相色谱系统耦合称之为液质联用. ;液相色谱的基本流程图;液相色谱的各部分示意图;仪器组成及开机 溶剂管理系统的准备 样品管理系统的准备 运行样品 数据采集 报告打印 关机 ;Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法 ; 2 开机;溶剂管理系统的准备;溶剂管理系统的准备;必须用色谱纯有机溶剂，水或缓冲盐要用超纯水； 水相流动相需要每48h重新配制，特别是100%含水流动相； 检查6根管子是否均在液面下，必须保证6根管子全部插到溶剂瓶底部。;打开真空脱气机（degasser）;Wet prime（执行湿灌注）;流动相平衡色谱柱;流动相特性;流动相方面要求;流动相的转换要缓慢 流速(压力)的变化幅度较小，比较稳定 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求; 装载样品盘（loading carousels）： 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“ Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按【 Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。 ;样品方面要求;运行样品;;运行样品;在浏览项目中打开你的项目，通过“新建方法组”来设定具体仪器方法、处理方法、报告方法→另存为“方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法名相统一）→完成。 ;在“运行样品”中打开设定的仪器方法，并在设针时选定设定的方法组来对样品进行分析。;数据处理;PDA数据处理;;;;色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）;色谱图 参数基本概念;峰面积 － Peak Area 峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差；σ － Standard Error 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半 拖尾峰 － Tailing Peak 后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰 － Leading Peak 前沿较后沿平缓的不对称峰 鬼峰 － Ghost Peak 并非由试样所产生的峰；亦称假峰;基线 － Baseline 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线 基线飘移 － Baseline Drift 基线随时间定向的缓慢变化 基线噪声；N － Baseline Noise 由各种因素所引起的基线波动 谱带扩展 － Band Broadening 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象;死时间，t0 － Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间 保留时间，tR － Retention time 组分从进样到出现峰最大值所需的时间 死体积，V0 － Dead volume 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积 保留体积，VR － Retention volume 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积; 在结果中，选择图谱点打印，报告打印时，选择设定好的报告模式，或者选择 “缺醒单个报告”模式打印，在待打印的模式下可以编辑报告显示的信息，比如表头，色谱图的显示范围，表格中所需内容等。;;;关 机;HPLC使用常见注意事项;Thank you ！