一种基于SARS冠状病毒S蛋白的新型靶向输送生物仿真系统的研.pptx

一种基于SARS冠状病毒S蛋白的新型靶向输送生物仿真系统的研究;研究背景;SARS 冠状病毒(SARS-Cov)，属于巢状病毒目(Order: Nidovirales),冠病毒科(Family: Coronaviridae)，冠状病毒属(Genus: Coronavirus)。根据其基因组结构分类，它属于单链正义RNA 病毒[(+)sense, ssRNA Virus]。;S蛋白（spike-protein）即伸出包膜的棒-球形的糖蛋白，它在病毒与宿主细胞表面受体结合及介导病毒包膜和细胞膜融合并进入细胞的过程中，起关键性作用，也是冠状病毒主要的抗原蛋白。 HE蛋白构成包膜的短突起，其可能与冠状病毒早期吸附有关，某些CoV的HE蛋白可引起红细胞凝集及对红细胞产生吸附 M蛋白则是一种跨膜蛋白，在病毒的包膜形成与出芽(budding)过程中起重要作用。 E蛋白是一种相对较小的蛋白质，主要散在分布于病毒包膜上。 N蛋白是一种碱性磷蛋白，其中央区同基因组RNA结合，形成卷曲的核衣壳蛋白;;S1能够与细胞受体特异性结合， S2介导病毒与细胞膜发生融合作用 ;DNA测序结果表明SARS-CoV的S 蛋白长度为1256 个氨基酸 ，S2蛋白约600个氨基酸。 S2包括三个螺旋结构（helix）和一个穿膜区（1197~1218 aa） S2的三个螺旋结构是介导病毒包膜与细胞融合（membrane fusion）的关键结构；而穿膜区则将S蛋白固定在病毒包膜上 S1与特异性受体的高亲和力结合并不能直接介导细胞融合，但却可有效地驱动S2介导的细胞融合反应。;研究背景;;3~4轮筛选;噬菌体展示技术最初被广泛应用于从复杂的重组文库中筛选和特定靶分子结合的蛋白或多肽。 随着发展，该技术也已经被应用到细胞系、组织和疾病模型水平，筛选和鉴定靶向特定细胞系、组织和疾病模型的结合蛋白和多肽。 目前，恶性肿瘤治疗的关键问题之一就是缺乏特异性攻击肿瘤细胞的有效药物。 噬菌体展示技术已经被用来筛选和表达与不同肿瘤细胞表面的特异性大分子结合的多肽或蛋白，以期将这些蛋白或多肽应用到肿瘤靶向药物的设计中。;培养人肺腺癌A549细胞;;实验流程;近年来我国的肺癌发病率明显上升，在一些大中城市肺癌已占常见恶性肿瘤的首位。 生物靶向治疗已逐渐成为一种新的肿瘤治疗策略。 本靶向输送系统，巧妙地利用了SARS-CoV特异性侵袭肺组织的分子进化机制，结合肿瘤靶向多肽和可诱导肺癌细胞凋亡的蛋白或多肽，靶向输送杀灭肿瘤细胞，具有良好的开发应用前景和实践意义。;研究进展;研究进展;BRASIL法（ Biopanning and rapid analysis of selective interactive ligands ）是一种通过差异离心的方法将细胞-噬菌体复合物从亲水环境分离到疏水性有机相中，从而与未结合细胞的噬菌体分离的过程。 与细胞结合的噬菌体和细胞一起被离心沉淀到有机相中，而未结合的噬菌体仍以可溶形式保存于上层水相中。 该法仅需一步离心分离就可完成，比当前细胞筛选方法更加快速、简单；而且筛选得到的多肽更加敏感和特异。 最常用的有机相是9:1 [v:v]的邻苯二甲酸二丁酯和环己烷。 ;研究进展;利用建立的筛选方法，以A549腺癌细胞 为靶细胞，筛选噬菌体随机12肽库 生物信息学聚类阳性克隆，确定靶向肽序列 构建pET-14b-S2-GFP-TP和pET-14b-S2-MKK6-TP质粒 评价蛋白定向输入功能 ;Thanks;1、Genius only means hard-working all ones life. (Mendeleyer, Russian Chemist)? 天才只意味着终身不懈的努力。20.8.58.5.202011:0311:03:10Aug-2011:03 2、Our destiny offers not only the cup of despair, but the chalice of opportunity. (Richard Nixon, American President )命运给予我们的不是失望之酒，而是机会之杯。二〇二〇年八月五日2020年8月5日星期三 3、Patience is bitter, but its fruit is sweet. (Jean Jacques Rousseau , French thinker)忍耐是痛苦的，但它的果实是甜蜜的。11:038.5.202011:038.5.202011:0311:03:108.5.202011:038.5.2020 4、All that you do, do with your might; things done by halves are never done ri