实验一植物体内游离脯氨酸含量的测定.pdfVIP

实 验 一 植 物 体 内 游 离 脯 氨 酸 含 量 的 测 定 一、目的 在逆境条件下（旱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸的含量显着增加，植物体内脯氨 酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性， 抗旱性强的品种积累的脯氨酸多。 因此测定脯 氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。 另外， 由于脯氨酸亲水性极强， 能稳定原生质胶 体及组织内的代谢过程， 因而能降低冰点， 有防止细胞脱水的作用。 在低温条件下，植物 组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。 二、原理 磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应， 当用磺基水杨酸提取植物样品时， 脯氨酸便游离于 磺基水杨酸溶液中。 然后用酸性茚三酮加热处理后， 茚三酮与脯氨酸反应， 生成稳定的红 色化合物， 再用甲苯处理， 则色素全部转移至甲苯中， 色素的深浅即表示脯氨酸含量的高 低。在 520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。 三、材料、仪器及试剂 1. 材料： 植物叶片 。 2. 仪器： 分光光度计；电子分析天平；离心机；小烧杯；普通试管；移液管；注射器； 恒温水浴锅；漏斗；漏斗架；滤纸；剪刀；洗耳球。 3 . 试剂及配制： －1 2.5 ﹪酸性茚三酮溶液配制： 将 1.25g 茚三酮溶于 30ml 冰醋酸和 20ml 6mol ·L 磷 酸中，搅拌加热（ 70℃）溶解，贮于冰箱中 。 3 ％磺基水杨酸配配制： 3g 磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至 100ml。 -1 10 μg ·ml 脯氨酸标准母液配制： 精确称取 20mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸 馏水溶解， 再倒入 200ml 容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度 （为100 μg ·ml－1 脯氨酸母液） ， -1 再吸取该溶液 10ml, 加蒸馏水稀释定容至 100ml, 即为 10 μg ·ml 脯氨酸标准液。 冰醋酸；甲苯。 四、实验步骤 1. 脯氨酸标准曲线的制作 1.1 取 6 支试管，编号，按下表配制每管含量为 0～12 μg 的脯氨酸标准液。 加入表中试剂后，置于沸水浴中加热 30min。取出冷却，各试管再加入 4ml 甲苯，振荡 30 秒钟，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。 管 号 试 剂 0 1 2 3 4 5 10 μg ·ml-1 脯氨酸标准液（ ml ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ ml ） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 冰醋酸（ ml ） 2 2 2 2 2 2 2.5 ﹪酸性茚三酮（ ml ） 2 2 2 2 2 2 每管脯氨酸含量（μ g ） 0 2 4 6 8 10 1.2 用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照， 在 520mm波长处测定吸光度（ A）值。 1.3 标准曲线的绘制 以