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黑曲霉生产纤维素酶工艺设计 1. 维素酶 1.1 纤维素酶的组分 纤维素酶是水解纤维素及其衍生物生成葡萄糖的一组酶的总称，是由多种水 解酶组成的一个复杂酶系。纤维素酶是起协同作用的多组分酶系，国内外多数根 据纤维素酶的底物及作用的位点和释放的产物将其分为三类: （1）葡聚糖内切酶 (endo-l，4-D-glueanase，EC3.2.1.4)来自真菌的简称EG，又称CMC 一Na 酶;来 自细菌的简称 Lne)。这类酶不能水解结晶纤维素如棉花和微晶纤维素等，主要 作用于纤维素内部的非结晶区和一些可溶性的底物如羧甲基纤维素和羟乙基纤 维素，随机降解β -1，4糖苷键，将长链纤维素分子截短，产生大量带非还原性 末端的小分子纤维素、纤维二糖和葡萄糖, 其分子量大小约23-146KD。(2) 葡聚 糖外切酶(exo-1，4-β -D-glucanase，来自真菌简称CBH;来自细菌简称Cex)。作 用于纤维素线状分子末端，分解1，4-β -D糖苷键，每次从底物的非还原端切下 一个纤维二糖分子，故又称纤维二糖水解酶，可以水解无定形纤维素和微晶纤维 素，对棉花有微弱的作用分子量约 38-118KD。(3)β -葡萄糖苷酶 (β -D 一 glucosidase，简称BG)纤维素大分子首先在GE酶和CBH酶的作用下降解为纤维 二糖，再由BG酶水解成二个葡萄糖分子。其分子量约为76KD。 1.2纤维素酶的作用机制 目前对纤维素酶的分子机制大致有3种假说:改进的Cl一Cx假说、顺序作 用假说和竞争吸收模型。它们都认为，纤维素酶降解纤维素时，先吸附到纤维素 表面，然后其中的内切酶在葡聚糖链的随机位点水解底物产生寡聚糖，外切酶从 葡聚糖链的还原或非还原端进行水解产生纤维二糖，β -葡萄糖苷酶水解纤维素 二糖为葡萄糖。在纤维素溶解糖化过程中内切酶和外切酶的比值会显著地影响纤 维素溶解活力，而且在纤维素糖化过程中β -葡萄糖普酶组分的加入会使这种协 [1] 同作用大大加强 ，应该注意的是，这种协同作用不仅作用顺序不是绝对的，而 且各酶的功能也不是简单、固定的。研究表明，GE 和 CHB 都能引起纤维素的 分散和脱纤维化 (沿纤维素的经度轴方向分层，形成更薄更细的亚纤维)，这样 纤维素的结晶结构被打乱，导致变形，使纤维素酶能深入纤维素分子界面之间， 从而使纤维素孔壁、腔壁和微裂隙缝的压力增大，水分子的介入又使纤维素分子 之间的氢键被破坏，产生部分可溶性的微结晶，利于进一步被降解。 1.3纤维素酶在实际生产中的应用 据统计，1995年，世界工业酶的销售量大于10亿美元;而1999年实际达到 16亿美元。工业酶总供应量的60%来自于欧洲，其余40%来自于美国和日本， 而且大约75%的工业酶是水解酶，其中糖营水解酶居第二位[17]。目前纤维素酶 的应用还主要集中在微生物纤维素酶的应用上。现在纤维素酶已被广泛地应用于 食品、酿酒、饲料加工、纺织、洗衣、农业、医药等多个领域中。 1.3.1纤维素酶在食品加工行业的应用 纤维素酶在食品加工行业应用极为广泛。在果蔬加工行业中，纤维素酶用来 软化植物组织。和一般的加热蒸煮、酸碱处理等方法相比，采用纤维素酶处理可 以避免营养物质特变是维生素的流逝。采用纤维素酶水解法对海藻粉进行前处理 可以提高海藻脂质的抽提率，充分获取海藻中的脂质资源，同时降低生产成本。 在油料作物加工中，传统的压榨法和有机溶剂法生产的油制品存在质量差产量点 的缺点。用纤维素酶代替有机溶剂进行加工，可以避免有机溶剂的残留，因而能 提高产品质量;另外酶反应条件温和，可以避免剧烈条件对产品质量的影响，同 时也降低了生产成本。在酿酒行业中，原材料中纤维素含量很高，加入纤维素酶， 使纤维素能转换为糖，原料利用率大大提高，且残渣相对锐减，不仅提高了产量， 同时使残渣处理的工作量减少，极大的提高了经济效益。 1.3.2纤维素酶在饲料工业中的应用 由于家禽家畜一般难消化利用纤维素和半纤维素。而在饲料中加入纤维素酶 制剂后，使纤维素和半纤维素转化为易吸收利用的糖类，使饲料得以充分的利用， 同时也避免纤维素和半纤维素在动物体内累积，促进动物的消化吸收。 1.3.3纤维素酶在纺织工业中的应用 近年来，人们通过微生物工程技术，利用纤维素酶对纺织品进行后处理。因 为纤维素酶能使麻、棉这类富含纤维素的物质表面剥离和纵向复合细胞间层侵 蚀，使纤维梢丝束化或者脱落，因此，经纤维素酶处理过的织物比较蓬松、丰满、 柔软、滑爽，且悬垂性好，吸湿性强，具有一定的丝光效果。有效地提高了棉麻