小鼠脾脏中分离淋巴细胞.doc

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 从小鼠脾脏中分离淋巴细胞 １小鼠断颈处死，酒精浸泡５分钟，超净台内打开左侧腹部皮肤，小心分离皮下组织和腹部肌肉暴露出脾脏，提起，剪去周围结缔组织，放入有PBS的小瓶中。无菌镊子夹碎，挤压脾脏，将获得的细胞悬液移入无菌试管中。２另取无菌试管，先加入淋巴细胞分离液，然后将试管倾斜，略放平，吸取刚刚制备的细胞悬液缓慢的加入试管中，一般分离液和细胞悬液的体积比为１：２，要轻要慢，不要冲破了淋巴细胞分离液和细胞悬液的界面。选用适合自己分离目的细胞的离心力和时间进行离心。个人用1500转/分钟，20分钟。３离心后取出试管，可以看到不同的分层，一般上面是非细胞成分和细胞碎片，接下来是单个核细胞，再往下是红细胞等。吸走上层非细胞层弃之，吸出单个核层在另外无菌试管中，因为淋巴细胞分离液对细胞有毒性作用，加入PBS 离心洗两遍（PBS1000转/分钟，10分钟）。４，洗好的细胞加入１６４０培养液和２０％的血清中重悬，缓慢加入已经制备好的尼龙毛柱子中，封好，放３７度孵育一小时。一小时后取出，超净台内将柱子立起，针头下面放无菌试管（我们的柱子是用大号注射器做的），以HANKS液和血清先后缓慢冲洗，巨噬细胞贴在尼龙毛上不下来，B细胞也相对吸附冲洗下来的不多，所以冲洗来的大多是T细胞，纯度可打到８０％到９０％，再次冲洗并且用力挤压，这样得到的就是B细胞。得到的细胞可以以１６４０加血清配制的培养液进一步培养或做它用。但是淋巴细胞分离液得到的细胞只能算是粗分，如果实验要求高最好选用磁珠或流式分离。 亲爱的用户 亲爱的用户： 烟雨江南，画屏如展。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，感谢你的阅读。 1、最困难的事就是认识自己。 TIME \@ yy.M.d 20.6.28 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 DATE \@ MMM-yy Jun-20 DATE \@ HH:mm 20:11 2、自知之明是最难得的知识。 TIME \@ EEEE年O月A日 二〇二〇年六月二十八日 TIME \@ yyyy年M月d日星期W 2020年6月28日星期日 3、越是无能的人，越喜欢挑剔别人。 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 4、与肝胆人共事，无字句处读书。 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 5、三军可夺帅也。 DATE \@ dddd, MMMM d, yyyy Sunday, June 28, 2020 DATE \@ MMMM yy June 20 DATE \@ dddd, MMMM d, yyyy Sunday, June 28, 2020 DATE \@ M/d/yyyy 6/28/2020 6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。 TIME \@ h时m分 8时11分 TIME \@ h时m分 8时11分 DATE \@ d-MMM-yy 28-Jun-20 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 7、人生就是学校。 TIME \@ yy.M.d 20.6.28 TIME \@ yy.M.d 20.6.28 TIME \@ yy.M.d 20.6.28。 TIME \@ yyyy年M月d日星期W 2020年6月28日星期日 TIME \@ EEEE年O月A日 二〇二〇年六月二十八日 8、你让爱生命吗，那么不要浪费时间。 DATE \@ HH:mm 20:11 DATE \@ HH:mm:ss 20:11:15 DATE \@ M.d.yyyy 6.28.2020 DATE \@ dddd, MMMM d, yyyy Sunday, June 28, 2020