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慢病毒(过表达)包装步骤
秦超
转染
复苏293T细胞,传2-3代进行转染,转染推荐使用合元公司的慢病毒转染试剂。
转染步骤:(以10cm培养皿为例)
= 1 \* GB2 ⑴最好在铺细胞后20h左右进行转染,控制转染前细胞密度70%-90%,保证细胞处于良好的状态,转染前一小时把一半培养基(约5ml)换成新的(含血清,因为此转染试剂不需换液)。
= 2 \* GB2 ⑵加psin 10ug,pspax2 10ug,pmd2.g 5ug于800ul opti-mem,混匀
= 3 \* GB2 ⑶加40ul慢病毒转染试剂于800ul opti-mem,混匀
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