HPV21分型产品操作培训.pptx

凯普技术支持中心 2013.04;技术原理： 基因扩增 导流杂交 低密度基因芯片 分型： 15种高危型别： HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68. 6种低危型别： HPV 6,11,42,43,44,CP8304（81）.;宫颈脱落细胞 用棉试子擦去宫颈口的分泌物，取宫颈环状上皮与柱状上皮转化处宫颈脱落细胞 男性尿道标本 用细小棉拭子伸入尿道约2-4厘米，捻动拭子采集上皮细胞，将棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检（采集标本前2小时禁小便）。 男女性疣体标本 既可以直接切下疣体组织放进无菌玻璃管内，又可以用一次性注射器把疣体刺破后再用棉拭子反复擦拭病灶处脱落细胞置入无菌玻璃管，密闭送检。;;先采集HPV检测样本，再采集TCT或LCT、病理组织样本 样本采集后，如若不能马上检测，应将样本置于冰箱4℃存放，并在一周时间内检测。应避免反复冻融。 一周后检测的标本应保存在-20 ℃。;;超净工作台;;;男性样本或女性疣体样本提取方法（棉拭子样本） ;石蜡包埋组织样本提取方法 ; 匹基、达安等都是使用直接煮沸法提取的DNA，这样的DNA纯度较差，对于凯普HPV检测中的PCR扩增过程会产生抑制，所以不能使用。 　 使用过柱法试剂盒，比如QIAGENE提取的DNA，可以保证其DNA的纯度及浓度，可以使用。 ;;1 PCR试剂存放在-20℃中避光保存，避免反复冻融试剂。 2 配制时严格按说明书上的比例和量进行混合分装。 3 试剂准备区中进行，充分解冻试剂并且点动离心后，方可吸取混匀 4 酶与PCRmix要充分混匀。 5 分装和加样时，不可使用有粉橡胶手套，一般仅能佩戴薄膜手套。 6 PCR小管及其他实验耗材不可长时间置于紫外灯下照射，否则会抑制PCR扩增。 7 有条件的客户，要对离心管、移液器吸嘴进行高压灭菌，包装完整的PCR小管可直接使用。 8 注意对移液器的保养，移液器使用后应及时调回最大量程，并定期进行校准，防止量程偏大或者偏小。 9 加样时，尽量做到加完一个样，立即关盖，再加下一个样。加样完毕后，点动离心，清除气泡。 ;扩增区; ①蠕动泵损坏 启动蠕动泵后听不到蠕动泵运转的声音，请送修。 ②排液管粘连 这种情况一般出现???新仪器第一次使用或仪器闲置太久后第一次使用。当启动蠕动泵后听到仪器内部有类似“啪啪”的声音，可判断是排液管粘连 。 解决方法是：在反应室内注入水，然后启动蠕动泵直到排水即可。 ③排液管堵塞 主要是实验后清洗不彻底，或使用时间较久后，实验液体中的化学物质残留于排液管内形成结晶物，堵塞了排液管导致不能排液，其现象特征是启动蠕动泵后，有蠕动泵正常运转的声音，但没有液体排出。 解决方法：在反应室内加蒸馏水,升温至65℃并保持几分钟, 使结晶物溶化,然后排液。反复几次使排水管畅通。如若仍不能排液则需要拆出排液管来清洗或更换排液管。 ; ④ 密封不良 A 配件组装不良 多孔板及分隔膜、硅胶圈没有放好，形成空隙，造成整个系统不密封, 建议重新放置。 　B 多孔板问题 多孔板因跌落或其他原因造成变形，也会造成密封不良。另外由于多孔 板加工精度的限制，多孔板的厚度并不完全均匀，在放入反应室时，放置的面或方向不同都会造成排液速度的变化，有时甚至会引起排液慢的现象，如果是这种情况可把多孔板翻转一下。 　C 硅胶圈问题 硅胶圈的老化，弹性不足，也是造成密封不良的原因之一，同时也会引起互渗。硅胶圈平时使用后应存放在阴凉干净的地方，防止紫外线照射，定期更换硅胶圈。 ;外壳用软布沾清水或稀释的中性清洗剂拧干后擦拭，勿用酒精或其它有机溶剂清洁显示屏部分。 反应室、分隔室、多孔板、硅胶圈用软刷子刷洗3次，再用纸吸干表面的水珠，自然晾干。 分隔膜、硅胶圈冲洗即可，不要揉搓，用纸吸干表面的水珠，自然晾干。不可照紫外，不可浸泡次氯酸钠溶液。 外置电源表面的灰尘用干布擦拭干净即可，注意检查接线柱是否拧紧。;水浴锅;;杂交操作注意事项; ①互渗 互渗的测定方法参见技术巡访指引，若在杂交实验前发现有互渗现象需立即停止后续实验，重新安装分隔硅胶圈、分隔室及压扣盖，再进行互渗现象试验，如果仍然有此现象出现，则即使联系厂家更换硅胶圈。 ②反渗、下渗 A：确保分隔膜、硅胶圈、分隔室及压扣盖安装正确。 B：开泵抽液不要抽的太干，太快。待液体快排完时采用点动排液。 ③漏液 在杂交前发现漏液的话需重新安装配件。 在杂交过程中要时时查看反应室的液体情况，若有漏液现象再加适量的杂交液即可。;1）最佳：每次实验