04第四章植物组织培养技术.pptx

第四节 植物花药和花粉培养;单倍体的应用潜力;一、培养材料的选取与制备;（一）材料选择;2. 花粉发育时期;（二）预处理;（三）外植体制备;花粉培养来说，需制备花粉外植体： ①自然释放法。 ②研磨过滤收集法。 ③机械游离法。 ④磁拌法。 ;二、植株再分化（一）脱分化培养;1. 培养方式的选择;（6）看护培养： ;（7）微室培养;2. 基本培养基的选择;3. 培养温度的选择;4. 生长调节物质的选择;5. 碳源的选择;6. 其他添加成分;（三）再分化培养;1. 胚状体途径;2. 器官发生途径;（四）炼苗和移栽;三、单倍体植株鉴定和染色体加倍;（一）花药和花粉植株的倍性;（二）花药和花粉植株倍性鉴定;2. 结实性鉴定 单倍体植株、三部体植株和非整体植株虽然都能开花但不结实；二倍体植株则开花结实都正常；四倍体植株虽能开花和结实，结实性不良，但经过长期选择淘汰，其结实性可能提高。;3. 染色体数目鉴定 采用涂片法(或压片法)和去壁低渗法，通过检查根尖或茎尖染色体数目，排除嵌合体的干扰，可同时对根尖以外的细胞，如嫩叶细胞、花粉母细胞等的染色体进行观察。;4. 遗传标记鉴定 （1）生化标记鉴定：以基因表达产物蛋白质为主的一类标记系统，常用的是同工酶标记。 （2）分子标记鉴定：标记检测的是植物基因组DNA水平的差异;5. 流式细胞仪鉴定法;（三）花药和花粉单倍体植株的染色体加倍;第五节 植物胚胎培养;（二）植物胚胎培养分类 胚培养：指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行培养的技术。 一般分为幼胚培养和成熟胚培养。 幼胚培养则指胚龄处于早期原胚、球形期胚、心形期胚、鱼雷期胚的培养。 成熟胚培养一般指子叶期至发育成熟胚的培养，其培养较易成功。;幼胚： 原胚－球形胚－心型胚－鱼雷胚－子叶胚;2. 胚乳培养 胚乳培养指对处于细胞期的胚乳组织进行离体培养的方法。 ;3. 胚珠培养 胚珠培养是指未受精或受精后的胚珠离体培养。;4. 子房培养 子房培养是指授粉和未授粉的子房培养;5试管受精 试管受精指在无菌离体条件下培养离体的未受精??房或胚珠和花粉，使花粉萌发产生的花粉管进入胚珠从而完成受精过程。;(二)植物胚胎培养的应用;二、植物胚培养;（一）胚培养的方法;2. 幼胚培养则指胚龄处于早期原胚、球形期胚、心形期胚、鱼雷期胚的培养。 ;（二）离体胚形态发生及影响因素;（3）早熟萌发 ：幼胚在培养中越过正常胚发育阶段，在未达到生理和形态成熟时迅速萌发长成幼苗，这一现象称为早熟萌发。这样产生的苗往往畸形、细弱、难易成活。因此，幼胚培养应防止早熟萌发。 （4）产生愈伤组织 在幼胚培养中常常能在追加生长调节剂时诱发愈伤组织产生，进而分化形成胚状体或不定芽。;2.离体胚培养影响因素 （1） 培养基 常用的培养基种类包括：成熟胚培养-Tukey、Randilph和Cox、White、MS、B5（1968）；未成熟幼胚培养-Rijven、Rappaport、Rangaswamy、Norstog、Nitsh、B5、MS 不同发育时期的胚要求蔗糖浓度不同，通常胚龄越小要求蔗糖浓度越高 培养基pH对幼胚生长也十分重要。一般pH范围在5.2-6.3 ;（2）附加物 氨基酸类。无论是单一的还是复合的氨基酸都能刺激胚的生长。 ·维生素类。各种维生素一直被用于胚培养中，对初期幼胚一般是必须的。 天然提取物 。CM、各种胚乳汁、酵母提取物，麦芽提取物等天然营养被广泛使用 生长调节剂。不同植物的胚培养对生长调节剂的需求很不一致。情况比较复杂。;（3）环境条件 弱光和黑暗更适宜幼胚培养，因为胚在胚珠内发发育时不见光的，但是到萌发时器需要光。光有利于胚芽生长，黑暗有利于胚根生长，因此，以光暗交替培养更佳。 （4）培养材料 材料基因型不同，胚培养的难易程度也不同。发育阶段以越幼嫩的胚越难以培养。 （5） 胚乳的看护培养 培养极早期的胚困难较大，胚乳看护培养在一定程度上有助于早期培养的成活与发育。 ;三、植物胚乳培养;（一）胚乳培养方法和培养后代特征;（2）培养基的选择 ①基本培养基。诱导愈伤组织常用基本培养基是MS、LS、White，其中MS使用频率最高。适当添加生长调节剂。 ②有机添加物。各种植物胚乳组织的培养对培养条件要求类似。 胚乳培养时，培养基配合使用生长素，细胞分裂素和天然营养物（即有机氮源），效果显著。 ③“胚因子”。胚在胚乳培养中的作用问题早期研究认为胚是必须的。 ④