DNA重组培训讲义.pptx

第五章 DNA重组;;第一节 同源重组Homologous recombination ;;;;特征;一、同源重组的分子模型;2、异源双链在重组位点上，每个双链都有一个由两个亲本DNA分子中的一股单链共同组成的双链区域，这段区域称为异源双链DNA（heteroduplex DNA）;3、分支迁移两个双螺旋形成的交叉连接很容易以拉链式效应扩散，也就是链交换可沿着双链滑动，这个过程称为分支迁移（branch migration）;4、Holliday结构;5、连接分子的拆分;;;;;二、细菌的基因转移与重组;1、细菌的接合作用 ;;2、遗传转化 ;3、细菌的转导;三、大肠杆菌重组的分子基础;1、Rec A 蛋白;Rec A催化的单链同化;;;RecA蛋白引起DNA同源重组的模型;2、Rec BCD酶;Chi 位点GCTGGTGGCGACCACCsites;3、Ruv A B C;;RecBCD 和RecA 的共同作用;;单链侵入 Single-strand uptake 链交换 Single-strand assimilation;重组修复;在复制叉处重组水平的ＤＮＡ修复;第二节　位点特异性重组;;一、λ噬菌体DNA的整合与切除;;整合和切除过程是在细菌DNA和噬菌体DNA专一性的附着位点(attachment site ,att)上进行的;;;1、整合反应;;模型说明att P和 att B部位进行了交叉断裂，互补单链末端进行交叉杂交。 λDNA交换点之间的距离为7bp，;;;2、切除反应（excision）;;;二、细菌的特异位点重组;;;第三节 Transposition ( 转座作用）;一、转座子（transposon，Tn）;转座过程有以下特征： ;二、转座子的类型和结构特征;;（1）插入序列（IS）;;;;（2）复合转座子（Tn）;;;二、转座子的转座机制;转座的机制;;复制转座作用引起了转座子的一个复制，它插入到一个接受位点。捐赠位点保持不变，以致捐赠者和接受者都有转座子的一个复制;非复制转座作用允许一个转座子像物体一样从捐赠们点移动到接受位点，这样就在捐赠位点留下了一个断裂。;保守的转座作用描述了另一种非复制结果，因子在捐赠位点被切除，然后通过一连串的反应插入到一个靶位，这样每一个核苷粘合都被保留。;复制转座作用通过一个共合体进行;;非复制转座作用借助断裂和重聚进行;TnA转座作用：复制型转座需要转座酶和分解酶;共合体结构的解离部位称为res，即是解离酶的结合部位。位点I是遗传上作为res部位的区域，它的缺失将使解离反应完全不能进行。然而解离反应也与部位II和III有关。因为其中任何一个部位缺失，解离反应都变得很弱。;三、转座子转座的特征;转座频率的调控;通过反义RNA的翻译水平控制;四、转座子的某些遗传学效应;;;五、 真核生物的转座因子;（二）果蝇的转座元件;;第四节 逆转录转座子;逆转录病毒基因组编码逆转录酶和整合酶，逆转录酶在侵染细胞的细胞质中把RNA转换成线型双链DNA。线型DNA进入细胞核,由整合酶催化整合作用,整合后的原病毒DNA通过宿主系统产生病毒RNA。;病毒RNA，双链DNA，整合进宿主DNA;;