纯化牛跟腱胶原蛋白的方法及其海绵的制备发明专利 (1).pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 CN 105601731 B (45)授权公告日 2018.07.13 (21)申请号 201410452847.3 (22)申请日 2014.09.03 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105601731 A (43)申请公布日 2016.05.25 (73)专利权人 浙江崇山生物制品有限公司 地址 311100 浙江省杭州市余杭区经济技 术开发区新颜路22号201A (72)发明人 彭新生　 (51)Int.Cl. C07K 14/78(2006.01) C07K 1/30(2006.01) A61L 15/32(2006.01) 审查员 张娜 权利要求书1页 说明书3页 附图4页 (54)发明名称 纯化牛跟腱胶原蛋白的方法及其海绵的制 备 (57)摘要 本发明涉及纯化胶原蛋白的方法，目的是通 过采用新的方法充分粉碎牛跟腱，纯化胶原蛋白 中用调节pH析出胶原法代替盐析、透析脱盐法， 海绵成型工艺中不添加化学交联剂，简易工艺流 程，提高胶原蛋白的提取率，达到高合格率的胶 原蛋白海绵，以及采用所述的胶原蛋白制备止血 海绵。 B 1 3 7 1 0 6 5 0 1 N C CN 105601731 B 权　利　要　求　书 1/1页 1.纯化牛跟腱胶原蛋白及其医用胶原蛋白海绵制备的方法，包括以下步骤： 1）用刀片将置于-20℃速冻的牛跟腱去除筋膜，肌肉和脂肪等杂质，用切片机切成 0.3mm厚，再用组织搅碎机充分粉碎； 2）用稀碱液溶液除去杂蛋白6 8小时，用蒸馏水洗至中性，再用醇类物质脱脂，用蒸馏~ 水洗至中性且无异味； 3）溶解在pH2 3的稀酸溶液中；~ 4）向上述溶液中加入胃蛋白酶，4℃下搅拌48 72小时；~ 5）将提取液离心，收集上清液，用10mol/L氢氧化钠将胶原溶液调至中性，收集得到的 胶原沉淀，先加入0.5mol/L的醋酸溶解胶原沉淀，再加入胶原溶液两倍体积的超纯水充分 搅拌水洗，离心取沉淀，继续加两倍体积的超纯水洗涤，如此重复操作，洗涤至胶原溶液为 中性，即可得到高纯度的胶原蛋白； 6）将胶原溶液搅拌均匀，分装于培养皿中，在-20℃下预冻6 8小时，用冷冻干燥机冻干~ 得到胶原海绵状材料； 60 7）用Co 辐照灭菌，包装，入库。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）采用切片机将牛跟腱切成薄 片，再用组织搅碎机充分绞碎，可保证牛跟腱在提取过程中与酸溶液充分接触，提高胶原蛋 白的提取率；所述步骤2）中的稀碱溶液为0.1mol/L 0.2mol/L的氢氧化钠溶液，醇类为10%~ ~ 12%的异丙醇或70% 75%的乙醇溶液；所述步骤3）中的稀酸为1% 3%的醋酸溶液；所述步骤4）~ ~ 牛跟腱与胃蛋白酶的重量比为（50 100）：1；所述步骤5）中主要利用透析的小分子经过半透~ 膜扩散到透析外液中，将胶原溶液中的小分子杂质与胶原蛋白大分子分开的原理，以阶梯 式稀释胶原溶液中醋酸的浓度的水洗方法，来代替使用透析袋透析溶液的方法。 3.根据权利要求1所述的制备胶原蛋白海绵的方法，其特征在于，胶原海绵中不含有化 60 学交联剂，采用物理交联法Co 照射灭菌，包装，入库。 2