一种适用于单链DNA的高通量测序文库构建方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 110904512 A (43)申请公布日 2020.03.24 (21)申请号 201811073055.X C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6886(2018.01) (22)申请日 2018.09.14 (71)申请人 广州华大基因医学检验所有限公司 地址 510006 广东省广州市番禺区小谷围 街中二横路22号A305房 申请人 深圳华大基因股份有限公司　 深圳华大临床检验中心　 天津华大医学检验所有限公司 (72)发明人 李志隆　汪宇盈　叶明芝　叶李莉　 刘继龙　宋炎　陈双双　 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 关畅　张立娜 (51)Int.Cl. C40B 50/06(2006.01) 权利要求书2页 说明书12页 序列表2页 附图4页 (54)发明名称 一种适用于单链DNA的高通量测序文库构建 方法 (57)摘要 本发明公开了一种适用于单链DNA的高通量 测序文库构建方法。本发明方法包括：将单链模 板与带有简并碱基的双链接头1相连(带有简并 碱基的特殊接头使单链模板与双链接头连接成 为可能，双链接头可随机地结合到单链模板上， 使接头序列与模板充分靠近，再使用T4 DNA连接 酶完成连接)；采用延伸引物进行延伸，得到双链 产物；将双链产物与接头2相连；以所得连接产物 为模板，进行PCR扩增，获得所需文库。本发明可 用于构建高通量测序文库，且可用于单链DNA文 库构建，本发明将提高高通量测序文库构建中单 A 链DNA利用率，进一步实现低起始量建库的目的， 2 在未来肿瘤早筛和预后监测应用中发挥关键作 1 5 4 用。 0 9 0 1 1 N C CN 110904512 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种适用于单链DNA的高通量测序文库构建方法，包括如下步骤： (1)在待建文库的单链DNA模板的3’末端连接上接头1，所述接头1为带有简并寡核苷酸 的双链接头； (2)采用延伸引物进行反应，得到双链产物； (3)在步骤(2)所得双链产物的末端连接上接头2； (4)以步骤(3)所得连接产物为模板进行PCR扩增，所得扩增产物即为所述文库。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 步骤(1)中，所述接头1为由接头1-1和接头1-2退火形成的所述接头1-2的3’端突出的 双链接头；所述接头1-1的5’末端修饰有磷酸基团，所述接头1-2的3’端突出的部分为用于 结合所述待建文库的单链DNA模板的3’端序列的简并寡核苷酸； 和/或 步骤(2)中，是以步骤(1)所得连接产物中含有所述接头1-1的那条链为模板，采用所述 延伸引物进行反应的； 进一步地，所述反应为恒温延伸或PCR扩增； 和/或 所述延伸引物为3’端含有所述接头1-1的反向互补序列的单链DNA或者所述延伸引物 的序列为所述接头1-1的反向互补序列； 和/或 步骤(3)中，所述接头2被连接到所述双链产物中含有所述待建文库的单链DNA模板的