对单链DNA进行处理的方法及应用发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 110791813 A (43)申请公布日 2020.02.14 (21)申请号 201810864455.6 (22)申请日 2018.08.01 (71)申请人 广州华大基因医学检验所有限公司 地址 510006 广东省广州市番禹区青蓝街 22号B区401室 申请人 深圳华大基因股份有限公司　 深圳华大临床检验中心 (72)发明人 王晶晶　刘继龙　宋炎　刘磊　 叶明芝　谭美华　 (74)专利代理机构 北京清亦华知识产权代理事 务所(普通合伙) 11201 代理人 赵天月 (51)Int.Cl. C40B 50/06(2006.01) C12Q 1/6858(2018.01) 权利要求书2页 说明书15页 附图2页 (54)发明名称 对单链DNA进行处理的方法及应用 (57)摘要 对单链DNA进行处理的方法及应用，本发明 涉及基因测序领域，具体涉及一种基于单链DNA 构建文库的方法。所述方法包括：在所述单链DNA 的3’末端连接第一接头，所述第一接头上连接有 结合剂，所述第一接头包括两条部分互补的链， 所述两条部分互补的链分别为第一条链和第二 条链，其中，所述第二条链比所述第一条链多5～ 10个碱基；利用吸附剂对经过所述第一接头连接 的单链DNA进行吸附，以便去除掉所述第二条链， 从而获得含有所述单链DNA的双链DNA。通过本发 明的方法构建基因文库，分子利用率高，建库用 到的样本起始量低，而且最低检出限更低。 A 3 1 8 1 9 7 0 1 1 N C CN 110791813 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种对单链DNA进行处理的方法，其特征在于，包括： 在所述单链DNA的3’末端连接第一接头，所述第一接头上连接有结合剂，所述第一接头 包括两条部分互补的链，所述两条部分互补的链分别为第一条链和第二条链，其中，所述第 二条链比所述第一条链多5～10个随机碱基； 利用吸附剂对经过所述第一接头连接的单链DNA进行吸附，以便去除掉所述第二条链， 从而获得含有所述单链DNA的双链DNA。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单链DNA的3’末端和5’末端均不含有 磷酸基团。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述第一条链上连接有所述结合剂，所 述第二条链上未连接有所述结合剂； 任选地，所述结合剂为生物素，所述吸附剂为链霉亲和素标记的磁珠。 4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述第二条链比所述第一条 链多出的5～10个随机碱基与所述单链DNA配对； 任选地，所述第二条链比所述第一条链多出6个随机碱基与所述单链DNA配对； 任选地，所述第一条链和所述第二条链的浓度比为1：1.2～2； 任选地，所述第一条链的核酸序列为SEQ  ID NO:1，所述第二条链的核酸序列为SEQ  ID  NO：2。 5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，利用引物SEQ  ID NO:3对所述 去除掉第二条链的单链DNA进行延伸，以便获得所述双链DNA。 6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括： 在所述双链DNA的5’末端连接上第二接头，以便建库获得测序文库。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第二接头包括两条少部分互补的链