基于点击化学的测序接头、双条形码测序文库及其构建方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 109694864 A (43)申请公布日 2019.04.30 (21)申请号 201710994066.0 (22)申请日 2017.10.23 (71)申请人 深圳华大基因股份有限公司 地址 518083 广东省深圳市盐田区洪安三 街21号华大综合园7栋7层-14层 (72)发明人 吴红龙　萧卓　刘华勇　宫艳萍　 袁剑颖　 (74)专利代理机构 深圳鼎合诚知识产权代理有 限公司 44281 代理人 孙银行　彭家恩 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12N 15/10(2006.01) C40B 80/00(2006.01) C40B 50/06(2006.01) 权利要求书1页 说明书11页 序列表1页 附图2页 (54)发明名称 基于点击化学的测序接头、双条形码测序文 库及其构建方法 (57)摘要 一种基于点击化学的测序接头、双条形码测 序文库及其构建方法，该测序接头包括：日期片 段，包括5’端的与正向引物部分或全部序列一致 的序列、中间的日期条形码序列以及3’末端的点 击化学反应基团；样本片段顶链，包括5’末端的 点击化学反应基团、中间的样本条形码序列以及 3’端的与反向引物部分或全部序列一致的序列； 样本片段底链，包括5’末端的磷酸化修饰、中间 的样本条形码序列；其中样本片段底链分别与日 期片段和样本片段顶链部分杂交；杂交后日期片 段的点击化学反应基团与样本片段顶链的点击 A 化学反应基团位置接近且能发生点击化学反应 4 而偶联。可以快速、高效地实现双条形码测序文 6 8 4 库构建，通过测序推断出核酸文库构建的日期， 9 6 9 实现准确的样本溯源。 0 1 N C CN 109694864 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种基于点击化学的测序接头，其特征在于，所述的测序接头包括如下三条核酸序 列片段： 日期片段，其包括5’端的与正向引物部分或全部序列一致的序列、中间的用于编码日 期信息的条形码序列以及3’末端的用于进行点击化学反应的基团； 样本片段顶链，其包括5’末端的与所述日期片段的3’末端基团进行点击化学反应的基 团、中间的用于区分样本的条形码序列以及靠近3’端的与反向引物部分或全部序列一致的 序列； 样本片段底链，其包括5’末端的用于与待测序核酸片段连接的磷酸化修饰、中间的用 于区分样本的条形码序列，该条形码序列与所述样本片段顶链中的条形码序列反向互补； 其中，所述样本片段底链分别与所述日期片段和所述样本片段顶链部分杂交；且杂交 后，所述日期片段中3’末端的用于进行点击化学反应的基团与所述样本片段顶链中5’末端 的用于进行点击化学反应的基团位置接近且能发生点击化学反应而偶联在一起。 2.根据权利要求1所述的测序接头，其特征在于，所述日期片段的3’末端的基团和样本 片段顶链的5’末端的基团分别包含叠氮基和炔基中的一种。 3.根据权利要求2所述的测序接头，其特征在于，所述点击化学反应是铜催化的叠氮- 炔基Husigen环加成反应。 4.根据权利要求1至3任意一项权利要求所述的测序接头，其特征在于，所述样本片段 底链与所述日期片段互补的碱基个数是6 10个。~ 5.根据权利要求1至3任意