一种灵活多变的降低污染及PCR偏倚的多标签二代测序文库接头发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112795990 A (43)申请公布日 2021.05.14 (21)申请号 201911112475.9 C12N 15/10(2006.01) G16B 20/50(2019.01) (22)申请日 2019.11.14 (71)申请人 广州华大基因医学检验所有限公司 地址 510006 广东省广州市番禺区小谷围 街中二横路22号A305房 申请人 深圳华大基因股份有限公司　 深圳华大临床检验中心 (72)发明人 李英镇　徐祖元　吴红龙　 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 张立娜 (51)Int.Cl. C40B 80/00(2006.01) C40B 50/06(2006.01) C12Q 1/6806(2018.01) 权利要求书2页 说明书13页 序列表3页 附图4页 (54)发明名称 一种灵活多变的降低污染及PCR偏倚的多标 签二代测序文库接头 (57)摘要 本发明公开了一种灵活多变的降低污染及 PCR偏倚的多标签二代测序文库接头。本发明提 供了接头，由DNA单链A(5’端到3’端依次为前导 区、随机标签、固定区、标签1和引物1结合区)和 DNA单链B(5 ’端到3’端依次为固定区1、引物2结 合区、固定区2、标签2和前导区)退火形成。本发 明能为二代测序的DNA文库加入多个标签序列， 大大提高样本间的分辨率。同时能为每个插入片 段加入唯一序列，可识别原始插入片段及PCR复 制子。因此本发明能解决病原微生物筛查中由于 单标签污染导致的假阳性以及突变检测中的由 A 于PCR扩增导致的突变比例偏移。所有本发明在 0 病原微生物检测、肿瘤基因检测、单基因病检测 9 9 5 等领域均具有较大的应用价值。 9 7 2 1 1 N C CN 112795990 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.接头，由DNA单链A和DNA单链B退火形成； 所述DNA单链A由5’端到3’端依次由前导区A、随机标签、固定区、标签1和引物1结合区 组成； 所述DNA单链B由5’端到3’端依次由固定区1、引物2结合区、固定区2、标签2和前导区B 组成； 所述DNA单链B中的所述固定区1和所述固定区2分别能够与所述DNA单链A中的所述固 定区靠近3’端和靠近5’端的部分反向互补；所述DNA单链B中的所述引物2结合区与所述DNA 单链A中的所述固定区不匹配； 所述DNA单链B中的所述前导区B与所述DNA单链A中的所述前导区A反向互补，且所述前 导区A的5’末端核苷酸经磷酸化修饰，所述前导区B的3’末端多出一个游离的核苷酸T。 2.根据权利要求1所述的接头，其特征在于：所述随机标签为若干个连续的N组成的寡 核苷酸，每个N均为A、T、C或G；和/或 所述标签1、所述标签2、所述前导区A和所述前导区B为核苷酸序列可变的区域。 3.根据权利要求1或2所述的接头，其特征在于：在所述DNA单链A中，所述前导区A的长 度为6-9nt；和/或所述随机标签的长度为6-10nt；和/或所述固定区的长度为27-37nt；和/ 或所述标签1的长度为