微生物学实验全套课件.ppt

( 三 ) 平板培养试验 将初发酵实验中产酸产气的后只产酸或 只产气的试管中的培养物用接种环取少 许，划线接种在品红亚硫酸钠培养基或 伊红美蓝培养基平板上，为了确保获得 分离的单菌落，须注意以下事项： 注意事项 （ 1 ）划线间距至少相隔 0.5 厘米； （ 2 ）接种钉尖端要稍弯； （ 3 ）先对试管轻击并使之倾斜，以免接种针 挑取到任何膜状物或浮渣； （ 4 ）划线时要用针尖的弯曲部分接触琼脂培 养基平面．以免刮伤或戳破培养基。划线 后培养皿倒置，于 37 ℃ 培养 18 ～ 24h 。 24h 后，观察在平板上出现的单个菌落， 其核心有深绿色金属光泽者为较典型的大肠 菌群菌落。尽可能挑取典型的或接近典型的 大肠菌群菌落，在营养琼脂斜面上划线，置 37 ℃ 培养 24h 。挑取斜面培养物制成涂片， 进行革兰氏染色，凡属革兰氏阴性杆菌，即 确认了大肠菌群细菌的存在． ( 四 ) 复发酵验证实验 经上述经染色为革兰氏阴性的典型菌 落，用接种环刮取部分接种于盛有乳糖培 养基的试管中，在 37 ℃ 培养 24h ，阳性反应 者即确认为大肠菌群细菌。 四、结果计算 在初发酵试验中，可能有极少数能发酵 乳糖产气的非大肠菌群细菌混在阳性可疑 反应管中，通过对初发酵中的阳性可疑管 进行平板和复发酵试验，并进行革兰氏染 色和细菌形态的观察，可将那些少量的非 大肠菌群细菌 (“ 假阳性管” ) 删除去，故在 记录时只能把三步试验都呈阳性的试管计 入阳性反应管。 如果初发酵接种水样量为 10mL 、 1mL 、 0.1mL ，可直接 查表 4 － 2 求出原水样 100mL 中大肠菌群指数（ MPN ）。如果 接种水样量低于上述水样量，则经下面的换算式计算。 目前我国系以 1L 水样中的菌数为报告值，即为 MPN × 10 。 10 （ mL ） MPN ? MPN 指数 × 接种量最大的一管的水样量（mL） 目前我国系以 1L 水样中的菌数为 报告值，即为 MPN × 10 。 水样的总大肠菌群检索表 出现阳性反应的试管数 每 100ml 中的细菌的 MPN 出现阳性反应的试管数 每 100ml 中的细菌的 MPN 10ml 管中 1ml 管中 0.1ml 管中 10ml 管中 1ml 管中 0.1ml 管中 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 3 4 5 0 2 4 5 7 9 0 0 0 0 0 0 2 2 2 2 2 2 0 1 2 3 4 5 4 6 7 9 11 13 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 1 2 3 4 5 2 4 6 7 9 11 0 0 0 0 0 0 3 3 3 3 3 3 0 1 2 3 4 5 6 7 9 11 13 15 0 0 0 0 0 0 4 4 4 4 4 4 0 1 2 3 4 5 8 9 11 13 15 17 1 1 1 1 1 1 3 3 3 3 3 3 0 1 2 3 4 5 8 10 12 15 17 19 下略 五、实验报告 1 、 简述实验过程。 2 、计算实验结果。 六、思考题 ? 用倾注平板法和涂布平板法计数，其平板上长出 的菌落有何不同？为什么要培养较长时间（ 48 小时） 后观察结果？ ? 大肠菌群的定义是什么？ ? 大肠菌群中的细菌种类，一般并非是病原菌，为 什么要选用大 肠菌群作为食品被污染的指标？ 实验十三 微生物生长曲线的测定 一、实验目的 1. 通过大肠杆菌数量的测量理解大肠杆菌的生物 特征和规律，绘制生长曲线； 2. 学习使用光密度法测定菌数。 二、实验原理 ? 适宜的条件下，在一定体积的培养基中培养某一 纯种微生物，并定时取样，测定细胞的数目。以 时间为横坐标、细胞数目的对数为纵坐标，可作 出该种微生物的生长曲线。经历延迟期、对数期、 稳定期和衰亡期四个阶段。 三、实验器材 ? 分光光度计、大肠杆菌液体培养 物、无菌水、 1ml 、 2ml 和 5ml 无菌吸管、试管架、恒温摇床等。 四、操作步骤 ? 1 、制备 YEPD 培养基 ? 2 、活化菌种：活化三次。 ? 3 、接种培养：接种 2% 的大肠杆菌菌于三角瓶液 体 LB 培养基中，摇匀。取 5ml 放入灭菌的试管中 （作为空白对照）。三角瓶于摇床中30℃培养。 每隔 2h 取样一次，均放入做好标签的灭菌空试管 中，并于冰箱中保存。 4 、生长曲线的测定 （ 1 ）总菌数的测定 ? 将上述培养液逐次进行稀释，然后选择合 适的稀释度进行光密度值的测定。并作出 大肠杆菌生长过程中总菌数的变化情况。 （ 2 ）活菌数的测定 ? 将上述培养液逐次进行稀释，然后选择合 适的稀释度进行平板菌落计数。并作出大 肠杆菌生长过程中活菌数的变化情况。 ? 五、结果记录 ? 培养时间（