【生物】常用的微生物分离纯化方法.docx

(一) 常用得微生物分别纯化方法 ..菌种分别纯化得方法有 :稀释混合倒平板法、 稀释涂布平板法、 平板划线分别法 、稀释摇管法、液体培育基分别法、单细胞分别法、挑选培育分别法等、其中前三种方法最为常用 ,不需要特别得仪器设备,分别纯化成效 (一) 常用得微生物分别纯化方法 . . 菌种分别纯化得方法有 : 稀释混合倒平板法、 稀释涂布平板法、 平板划线分别法 、稀释摇管法、 液体培育基分别法、单细胞分别法、挑选培育分别法等、其中前三种 方法最为常用 ,不需要特别得仪器设备 , 分别纯化成效好 , 现分别简 述如下 . 稀释混合倒平板法 . １、 , 平板就是指经熔化得固体培育基倒入无菌培育皿中 冷却凝固 , 而成得盛有固体培育基得平皿、该法就是先将待分别得含菌样品 用无菌生理盐水作一系列得稀释 (常用十倍稀释法 , 稀释倍数要适当 ), (０.5— 1；０ｍ l) 于无菌培育皿中 , 然后分别取不同稀释液少许 倾入 , 快速旋摇 , 充分混匀；待 已熔化并冷却至５０℃左右得琼脂培育基 琼脂凝固后 , 即成为可能含菌得琼脂平板； . , 于恒温箱中倒置培育肯定时间后 在琼脂平板表面或培育 基中即可显现分散得单个菌落； 每个菌落可能就是由一个细胞繁衍形 成得；挑取单一个菌落 , 1— ２次, 结合显微镜检测 一般再重复该法 个体形状特点 ,便可得到真正得纯培育物； 如样品稀释时能充分混匀 , 取样量与稀释倍数精确 ,就该法仍可用于活菌数测定； . .图 4 混合倒平板操作法示意图图５涂布平板操作法示意图 2..、 稀释涂布平板法,一就是会使一些严格好氧采纳上述稀释混合倒平板法有两个缺点菌因被固定在琼脂中间 ,缺乏溶氧而生长受影响,形成得菌落微小难于挑取 ;一就是在倾入熔化琼脂培育基时,如温度掌握过高,易烫死某些热敏锐菌 ,过低就会引起琼脂太快凝固, 不能充分混匀；.在微生物学讨论中 , 更常用得纯种分别 . 图 4 混合倒平板操作法示意图 图５ 涂布平板操作法示意 图 2..、 稀释涂布平板法 ,一就是会使一些严格好氧 采纳上述稀释混合倒平板法有两个缺点 菌因被固定在琼脂中间 ,缺乏溶氧而生长受影响 ,形成得菌落微小难于 挑取 ;一就是在倾入熔化琼脂培育基时 ,如温度掌握过高 ,易烫死某些 热敏锐菌 ,过低就会引起琼脂太快凝固 , 不能充分混匀； . 在微生物学讨论中 , 更常用得纯种分别方法就是稀释涂布平板 50℃(削减冷凝水 )得琼脂培育基 , 法；该法就是将已熔化并冷却至约 先倒入无菌培育皿中 , ,将肯定量 制成无菌平板；待充分冷却凝固后 (约 0；１ ml) 得某一稀释度得样品悬液滴加在平板表面 , 再用三角形 无菌玻璃涂棒涂布 ,使菌液匀称分散在整个平板表面 , 倒置温箱培育 后挑取单个菌落； . , 另一种简洁快速有效得涂布平板法 可省去含菌样品悬液得稀 释, 直接吸取经振荡分散得样品悬浮液 l 滴加入１号琼脂平板上 , 用 一支三角形无菌玻璃涂棒匀称涂布 , 用此涂棒再连续涂布 2 号、3 号、 4 号平板 (连续涂布起逐步稀释作用 ,涂布平板数视样品浓度而定 ), 翻转此涂棒再涂布５号、 6 号平板 , 经适温倒置培育后挑取单个菌落； . 该法可称之为玻璃涂棒连续涂布分别法； ３ . 平板划线分别法 . ,待充分冷却凝固 先倒制无菌琼脂培育基平板 后,用接种环以无菌沾取少量待分别得含菌样品 ,在无菌琼脂平板表面 进行有规章得划线；划线得方式有连续划线、平行划线、扇形划线或 , 微生物细胞数量其它形式得划线；通过这样在平板上进行划线稀释将随着划线次数得增加而削减 , 并逐步分散开来； 经培育后 ,可在平板表面形成分散得单个菌落； 但单个菌落并不肯定就是由单个细胞形成得,需再重复划线1— ２ , 微生物细胞数量 其它形式得划线；通过这样在平板上进行划线稀释 将随着划线次数得增加而削减 , 并逐步分散开来； 经培育后 ,可在平板 表面形成分散得单个菌落； 但单个菌落并不肯定就是由单个细胞形成 得,需再重复划线 1— ２次, 并结合显微镜检测个体形状特点 , 才可 获得真正得纯培育物；该法得特点就是简便快速、 . 图 6 .. 平板划线分别操作法示意图 个体细胞 得生长难以测定 , , 因此 ,微生物得 而且生长与繁衍就是交替进行得 , 生长繁衍一般不就是依据个体细胞得大小 而就是以群体细胞数目 , 主要有显微 得增加作为指标得；测定微生物细胞数量得方法许多 (MPN) 镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法、最大可能数 法、膜过滤法等、 测定酵母细胞数或霉菌孢子数常采纳在显微镜下直接进行计数 得方法 , 该计数方法被广泛应用于酒精、啤酒与白酒等得工业化生产 中； 平板菌落计数法被广泛应用于食品、饮品、水质与活菌制剂