第八章基因工程ppt第八章基因工程.pptx

第八章 基因工程;重组DNA技术;;;;;基因工程的应用; 首字母： 大写：细菌属名 2-3字母： 小写：细菌种名 如 EcoR 1 4 : 大写: 菌株 1，2…: 分离到的次序;;（2）产生平末端(blunt end):;5.同尾酶(isoaudamers): 识别序列不同,但产生相同的粘性末端 BamH 1 :G?GATCC Sau3A 1: N?GATCN ;1、DNA聚合酶 大肠杆菌中第一个发现，MW 109KD 方向：5＇?3＇ 还具有5‘?3’及3‘?5’外切酶活性. 缺口平移法标记DNA时常用; 两类：禽类成骨细胞性白血病病毒逆转录酶（AMV） moloney小鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV） 方向：5‘?3’ 作用：以RNA为模板合成DNA，构建cDNA文库 ;4、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）;内切酶、碱性磷酸酶、连接酶的作用; *分类： 克隆载体 质粒 入噬菌体 粘性质粒 M13噬菌体 表达载体 大肠杆菌表达载体 哺乳动物表达载体 ;质粒载体 大肠杆菌质粒载体 PBR322 枯草杆菌质粒载体 PNC3 酵母菌质粒载体 农杆菌Ti质粒载体 Ti 噬菌体载体 ? 噬菌体载体 Cos噬菌体载体 病毒载体 SV40病毒载体 乳头瘤病毒载体 ;⑴ 分子量相对较小，在细菌中稳定存在， 拷贝指数高。 ⑵ 具有遗传标记： 如抗生素性基因 ?—半乳糖酶基因（LacZ） ⑶ 具有多个酶的单一切点。称多克隆位点（ multiple cloning sites , MCS） 如 PBR322(人工合成)4.3Kb ：含 AmP?(氨卞青霉素)、 Tet?(四环素) 24个单一切点;PBR322;质粒的构建;质粒携带外源基因; 溶菌性（Lytic）：在细菌中连续增殖直到细菌裂时， 释放噬菌体。 溶原性（Lysogenic）：将其DNA整入细菌中。 **只有双链DNA的噬菌体才具有溶原周期。;噬菌体的溶原周期和溶菌周期;; 插入型载体：外源DNA克隆到?分子上，使噬菌体的某种生物 功能丧失效力，即插入失活效应。 如：?—半乳糖酶失活的插入型载体（蓝白筛选） 编码 ;;②取代型载体（又叫替换型载体） 图8-4基因工程原理P258;*由?DNA的Cos区与质粒构建 *环状双链DNA 特点；①含质粒的抗性标记如Amp?，Tet? ②带Cos区，可进行体外包装 ③一个或多个酶切位点 ④分子量小，容量大 /筛选AP平板;;;（1）大肠杆菌噬菌体 （2）基因组DNA全长6.5kb（单链） （3）感染后，可复制成双链DNA（RF，DNA） （4）当RF→100—200后，只有（+）链复制 4种常用载体的比较 P146 表8—2 筛选：蓝白筛选;;在受体细胞中表达（转录和翻译）外源基因的载体。;除含有原核序列：在E-Coli中的复制起始点、便于筛选的抗性基因 还包括真核表达元件 启动子/增强子 克隆位点 终止信号和加poly（A）信号;1. 特点：①遗传背景清楚——利于研究 ②繁殖快——易获得大量基因产物（20’一代） ③含质粒——利于基因转移 ④表达非E-Coli基因，其潜力几乎是无限的; 特点：①安全性大 ②遗传信息和生理状况更适合于真核基因表达