第六章水体污染与自净.pptx

一、实验目的 掌握微生物常规培养基的制备方法 学习无菌技术 学习玻璃器皿的包扎;二、实验内容 1、6种培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基（细菌） 高氏一号培养基（放线菌） 马丁氏培养基（真菌） 淀粉培养基（淀粉水解试验） 蛋白胨水培养基（吲哚试验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（V.P试验） 2、 移液管、培养皿、三角瓶、试管等的包扎 3、灭菌;三、实验原理 培养基medium:用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的营养基质。 水、C源、N源、矿物质、生长因素/因子、微量元素 培养基种类： 天然培养基、合成培养基、半合成培养基 固体培养基、液体培养基、半固体培养基 基础培养基、加富培养基、选择性培养基、鉴别培养基;四、实验步骤;培养基分装装置 ;斜面摆放法 ;棉塞的做法 a)棉塞的制作过程 (b)正误棉塞;培养皿的包扎;五、无菌技术;五、无菌技术;灭菌与消毒;常用的灭菌方法;1、火焰灭菌;2、干热灭菌 ;;3、湿热灭菌 ;3、湿热灭菌 ;3、湿热灭菌 ;手提式灭菌锅;卧式灭菌锅 ;是指含菌液体或气体通过细菌滤器，使杂菌留在滤器或滤板上，从而除去杂菌。 常用于许多不宜用湿热灭菌的液体物质，如抗生素、血清、糖类溶液等。 用于除菌的细菌过滤器，是由孔径极小，能阻止挡的陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃粉等制成.为了加快过滤,一般多采用抽气减压的方法,进行操作。;过滤除菌 ;;辐射灭菌(Radiation Sterilization)是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法。 用于灭菌的电磁波有微波，紫外线(UV)、X-射线和γ-射线等。;;酚类——损伤微生物细胞壁和细胞膜、酶钝化、蛋白质变性 醇类——溶解膜中的类脂，破坏膜结构，使蛋白变性（纯的或高浓度酒精使菌体表面蛋白凝固，使乙醇不易渗进细胞） 醛类——与蛋白质中氨基酸的多种基团共价结合而使其变性 酸类——抑制微生物酶和代谢活性 表面活性剂——改变细胞的稳定性和透性，细胞物质逸出 卤化物——与细胞中的酶和蛋白质中的酪氨酸结合，Cl2和漂白粉产生次氯酸和新生态氧（强氧化剂），破坏细胞膜结构;重金属——与酶或蛋白质上的—SH结合 氧化剂???—使细胞成份氧化 染色剂——碱性染料的阳离子基团与蛋白质氨基酸上的羧基或核酸上的 磷酸基结合，阻碍正常代谢 抗生素——多种机理：作用于细胞壁、膜、蛋白质、核酸等大分子合成 抗代谢物——竞争抑制，如磺胺类药物于对氨基苯甲酸类似，阻止叶 酸的合成 ;;墙壁光滑，地面平坦，避免积累灰尘，便于清洗消毒；不装风扇，通风换气通过空气调节装置 使用前，用2%新洁尔敏擦洗 再用75%酒精（或5%石炭酸）喷雾，使灰尘落下 最后用紫外灯照射约20min 定期熏蒸：一年二~四次 （细菌、真菌培养基检验） 用40%甲醛（6~10ml/m3 )或加半量高锰酸钾熏蒸，盛于铁制容器，电炉或酒精灯加热（应能随时终止热源），熏蒸后密闭12h以上，使用前1~2h用氨水中和。 其他熏蒸剂；乳酸（对细菌）、硫磺;;升汞（ 0.1% HgCl2） 漂白粉10g/150ml NaClO（2-10%） 酒精75% 苯酚（1%） 福尔马林（5%） 过氧化氢（3%） 氰化汞（0.1%） 高锰酸钾（2%） 硝酸银(0.1%);酸性培养基: 如10ml培养基中加三滴25%的乳酸 孟加拉红：0.035 g /L培养基 抗菌素: 金霉素（30μg/ml）可抑制多数细菌; 青霉素（20μg/ml）可抑制G+细菌; 多粘霉素（5.0μg/ml）可抑制G-细菌; 链霉素(40μg/ml)和氯霉素(50μg/ml)可抑制大部细菌. 除氯霉素可灭菌前加入外，其它抗菌素都是在培养基灭菌后并冷却到45℃左右时加入. 双层培养基或盖玻片;五、注意事项