抗虫转基因水稻培育.pptx

转基因抗虫水稻培育;水稻害虫 ;危害部位;2005年中国的主要病虫害及其发生面积 （单位：万公顷）;Yellow stemborer (Scirpophaga incertulas (Walker)) 三化螟;稻飞虱;稻纵卷叶螟;转基因抗虫水稻培育策略;一. 抗鳞翅目害虫（水稻螟虫和稻纵卷叶螟）转基因水稻培育;研究进展;第一代抗虫转基因水稻培育;;T;;The Bt transgenic line (right) and the nontransgenic line (left) against natural infestation of leaffolder in the no chemical spread field;Reaction of 华恢1号 (right) and Minghui 63 control (left) against heavy artificial infestation of yellow stem borer;Reaction of Bt Shanyou 63 (right) and Shanyou 63 control (left) against artificial infestation of yellow stem borer;研发历程;第二代转基因抗虫水稻培育;cry1C、cry2A 与cry1A的同源性很低，但它们编码的毒蛋白都能毒杀水稻的主要害虫——鳞翅目昆虫； cry2A和cry1C之间的同源性也很低，大量试验显示， Cry2A 和 Cry1C之间不存在交叉抗性，以及它们与Cry1A 也不存在交叉抗性. 至今，没有任何试验结果表明Cry2A和Cry1C蛋白对人和牲畜具有毒性或过敏原性。;转化受体: 优良籼型三系恢复系—明恢63;;愈伤的诱导、继代，抗性愈伤筛选，抗性植株再生、生根和移栽。(a) 明恢63种子诱导30天后的胚性愈伤；(b) 胚性愈伤在继代培养基上继代、增殖；(c) 在选择培养基（含 25mg/ml Basta）上筛选抗性愈伤；(d) 抗性愈伤再生植株；(e) 再生植株生根；(f) 再生植株移栽入温室。;转基因植株的分子检测;当选纯合转基因株系的室内抗虫性试验;纯合转基因株系;cry1C* 转基因茎段;cry2A*转基因茎段;转基因植株中Bt蛋白表达量的定量分析;;;★ 对2个来自于不同转基因家系（T2A-1、T1C-19）的转基因植株的不同组织和不同发育时期的Bt蛋白浓度的测定结果显示：;;材料;在全生育期不喷施杀虫剂条件下，cry2A* 纯合转基因株系对螟虫的抗性表现 (武汉, 2004) ;在人工接虫条件下，当选的cry2A*纯合转基因株系对螟虫的抗性表现 (武汉, 2005);材料;株系;株系; 当前，转基因抗虫水稻品系T1C-19和T2A-1已经完成为期二年的生产性试验。同时我们于2007年开始委托相关机构对T1C-19和T2A-1进行转基因食品安全性相关的检测，现已经完成。计划今年7月申请安全证书。;双价Bt基因抗虫水稻培育; 双价Bt基因的纯合株系的培育及其 田间农艺性状考察 已经配制了1C*/1Ab、 2A*/ 1Ab、1C*/1Ac、 2A*/1Ac和1C*/2A*的正反交组合。并通过自交选育出纯合的双价转基因株系。 已经完成的工作：;材料;材料;纯合转基因株系的室内抗性试验;材料;材料;材料;杂种F1田间小区试验结果;材料;Cry1Ac (μg/g鲜重);分蘖期蛋白含量测定;Cry1C (μg/g鲜重);Cry2A (μg/g鲜重);图. 双价Bt水稻的田间抗虫表现。A：1Ab+1C组合；B：1Ab+2A组合；C：1Ac+1C组合；D：1Ac+2A组合；E：1C+2A组合。明恢63对照始终在图的右边。 ;第三代抗虫水稻;绿色组织特异性表达的Bt抗虫水稻培育;启动子表达模式:;将Prbc与cry1C*基因构建成融合基因，然后转化水稻品种中花11。 将选育的纯合转基因株系进行了田间抗虫性考察、不同发育时期和不同组织外源蛋白表达量检测以及农艺性状考察。;纯合株系　;不同发育时期叶片Bt蛋白含量测定：;蜡熟期胚乳Bt蛋白含量测定：;转基因株系;转基因株系;;策略： 1）内源多基因聚合和多基因转化 2）RNAi转基因育种 3）抗虫Bt蛋白筛选及其基因转化;完成了褐飞虱、灰飞虱和白背飞虱表达组的测序工作，挑选出上百条候选基因序列； 建立了褐飞虱人工饲养方法； 利用dsRNA喂食，筛选到几十个有效片断，利用dsRNA策略转化了其中的20个片断，转基因植株的抗性检测工作正在进行中； 通过分子标记辅助选择培育出聚合两个基因的抗褐飞虱新品系，达到中抗水平； 挑选50多个不同类Bt蛋白，已经喂食了其中的30多个。 ;;抗鞘翅目害虫转基因水稻培育