菌种传代与复苏.pdf

______________________________________________________________________________________________________________ 4.1 菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制 备，菌苗的生产、 微生物致病性研究， 药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的 菌种、 微生物具有生命活力， 在传代过程中易发生变异甚至死亡， 因此菌种传代与保藏是一 项重要的基础工作。 4.2 菌种代号 国内药品微生物检验所用的菌种代号是 CMCC(F) 或 CMCC(B) ，CMCC-- 中国医学菌种 保藏中心， 、，B——代表细菌， F——代表真菌。 金 黄 色 葡 萄 球 菌 CMCC(B)26003 大 肠 杆 菌 CMCC(B)44102 枯 草 芽 孢 杆 菌 CMCC(B)63501 白色念珠菌 CMCC(F)98001 黑曲霉 CMCC(F)98003 4.3 传代和接种 4.3.1 菌种冻干粉复苏 4.3.1.1 把冻干菌种管、灭菌 1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面 数支，移入接种室或净化台。 4.3.1.2 先用砂轮将冻干菌种安瓿瓶颈部挫出挫痕， 再将冻干菌种管外壁用 75% 酒精擦 洗消毒，稍干，用 75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封 口一端在火焰上烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端， 是骤冷而炸裂。 4.3.1.3 取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，领取一只灭菌 滴管， 在火焰旁吸取营养肉汤少许， 加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管 内菌液， 分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内， 并将滴管及菌种管投入消毒液内， 将已接 种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。 4.3.2 菌种斜面传代操作 精品资料 ______________________________________________________________________________________________________________ 4.3.2.1 培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上注明菌种名 及菌种编号。至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约 30 分钟，待温度平衡后再移入接种 室或超净工作台。 4.3.2.2 点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端， 将接种环烧红 30 秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过 3 次。左手将管 口在火焰上旋转烧灼，右手无名指， 小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞， 将接种环深入管内先 在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种环， 并将 菌种管口移至火焰旁。 4.3.2.3 堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面一支，照上述操作打开棉塞， 将接种环深入管内至琼脂斜面的底部， 由底向上， 将接种环轻贴斜面的表面曲折移动， 使细 菌划在斜面的表面上。 4.3.2.4 取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火 焰上烧灼灭菌。 4.4 菌种的培养与保存 4.4.1 大肠杆菌 35-37 摄氏度培养 48 小时 金黄色葡萄球菌 30-35 摄氏度培养 48 小时 枯草芽孢杆菌 30-35 摄氏度培养 48 小时 白色念珠菌 23