微生物学实验课件.ppt

微生物学实验目录 实验一：光学显微镜的构造和使用方法 实验二 : 细菌的革兰氏染色 实验三：酵母水浸片的制备－细胞数及死亡率的测定 实验四：显微镜测微技术 实验五：霉菌形态观察 实验六：培养基的制备与灭菌 实验七：微生物的分离与筛选 实验八：淀粉酶产生菌的检出 实验九：大肠杆菌的主要生化特性 实验十：理化因素对微生物的影响 --- 紫外线的杀菌作用 实验十一：食品中杂菌总数及大肠菌群的检验 实验一 光学显微镜的构造和使用方法 一、实验目的 ? 熟悉光学显微镜基本结构和用途； ? 掌握低倍镜、高倍镜使用方法 ; ? 掌握使用显微镜观察微生物的形态； 二、实验器材 ? 显微镜 ? 玻片标本 ? 酵母菌 ? 载玻片、盖玻片、擦镜纸 ? 香柏油、二甲苯、 三、实验内容 1. 光学显微镜的构造 ? 机械系统部分 ? 光学系统部分 ? 照明系统部分 机械部分 镜座 镜柱 活动关节 镜臂 调焦器 镜筒 物镜转换器 载物台 推片器与游标卡尺 光学系统部分 目镜 ( 接目镜 ) “5 × ” ，“ 10 × ” 的含义。 目镜指 针 低倍镜 (8x ， 10x) ： 0.25,160 (40x,45x):0.65,160/0.17 高倍镜 (90x,100x):1.25,160/0.17 油 镜 物镜 ( 接物镜 ) 如何计算显微镜的放大倍数？ 照明系统部分 ： 内光源与外光源 光 源 反光镜 ： 凹面镜与平面镜 ： 升高与降低聚光镜 聚光镜 ： 放开与关闭光圈 光 圈 如何调节观察视野的明暗度？ 2. 光学显微镜的使用 ? 取镜 ? 放镜 ? 对光 ? 放片 ? 调焦 ( 粗调焦和细调焦 ) 低倍镜的使用 高倍镜的使用 问题思考： 对颜色深的标本与颜色浅的标本在观察过程中有何不同？ 3. 显微镜使用注意事项 ? 显微镜持取正确姿势 ? 使用前后的镜头维护 ? 注意标本的放置方向 ? 观察时注意双目齐睁 ? 高倍镜不得使用粗调 ? 严 禁 拆 卸 任 何 部 件 ? 使用后恢复机器原貌 四、思考题 如何根据观察对象使用镜头？ ? 为什么先用低倍镜观察 ? 实验二 细菌的革兰氏染色 一 目的和要求： 1 、掌握革兰氏染色的原理及方法 2 、初步掌握无菌操作技术 二、实验用品 ? 菌种：大肠杆菌斜面菌种； ? 试剂：结晶紫染液；蕃红染液； ? 其它：显微镜；载玻片；接种环； 95 ％乙醇 八叠球菌斜面菌种 碘液； 香柏油；酒精灯；擦镜纸 三、 基本原理： 革兰氏染色法是 1884 年由丹麦病理学家 Christain Gran 创立的。 ? 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 ? 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成 的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低。 ? 革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类 脂质含量高。 ? 四、实验步骤 1 、 涂片：将大肠杆菌和八叠球菌 分别涂片、干燥、固定 2 、染色： （ 1 ）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 （ 2 ）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 （ 3 ）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用 95% 乙醇滴洗 至刚刚无紫色为止，约 20 — 30 秒，立即用水冲净乙醇 （ 4 ）复染：用番红液染 1--2 分钟，水洗 3 、镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准， 革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 4 、混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察 。 经此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌 为革兰氏阳性菌；细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染 上复染剂的颜色（红色）的细菌为革兰氏阴性菌。 大肠杆菌（ G - ） 八叠球菌（ G + ） 五、实验报告 ? ? ? ? 1 、结果：画出 2 株细菌的染色观察结果（颜色、 革兰氏染色反应）。 2 、思考题： 1 ）作革兰氏染色涂