课程名称医学微生物学实验实验四.pdf

课程名称 医学微生物学实验 授课题目 实验 2 授课日期 2016 年 9 月 23 日 授课班级 2014 临八 授课时数 3 授课方式 实验 （一） 掌握紫外线消毒灭菌法。 授 课 （二） 熟悉物理因素对细菌的影响 重 点 （三） 熟悉细菌各种生长现象及细菌的代谢产物。 、 难 点 （四）了解细菌常用培养基及生物因素对细菌的影响，了解细菌的变异。 （一） 革兰染色 10 ’ 1. 提问 + - 2. 结果 G , G 3. 意义 鉴别 G+ - , G ,初筛标本；指导用药；与致病有关， 大多 G+, 外毒素， G- 内毒素 4. 原理 （1） G+ 菌胞壁结构致密。肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入。同时乙醇 - 使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止结晶紫 — 碘复合物从胞内渗出。 G 菌较为疏松， 肽聚糖层很薄，而外膜、脂蛋白、脂多糖又均含大量脂质，易被乙醇溶解，致使细 胞壁通透性变大，使结晶紫 -- 碘复合物被乙醇溶解析出而脱色。 （2 ） G+ 菌等电点（ PH2~3 ）比 G- 菌（ PH4~5 ）低。在相同 PH 下， G+ 所带的负 电荷比 G- 多。故与带正电的结晶紫染料结合较多，不易脱色。 授 + + - 上述两者中以 1）更重要，如 G 菌胞壁有破损，其染色性由 G -- 〉G 课 5. 影响因素 内 （1） 菌龄， 稳定期 G+ →G- 容 （2 ） 如果细菌细胞壁破损 G+ →G- 、 （3 ） 脱色过长 G+ →G- ，脱色过短 G- →G+ 教 6. 注意点 具 涂片薄而均匀，严格无菌操作；干燥时注意勿将标本烤枯；固定目的：杀菌，粘 附，染料穿透及防止细菌被洗脱；轻轻冲洗；吸水纸印干 与 （二）细菌的变异 时 1. 形态的变异：细菌在一定环境下有相对恒定的形态结构，环境的改变有时会引起细菌 间 形态发生改变。如：正常鼠疫杆菌，普通培养基上生长呈卵圆形，两端钝圆并深染的短杆 分 菌，在高盐培养基上生长可出现大小不等的多形态。 配 鞭毛的变异：鞭毛是细菌的运动器官，变形杆菌具有鞭毛，可以在普通琼脂平板表 面形成迁徙生长的菌膜；但在含 0.1% 的石炭酸培养基上生长时，该菌不能形成鞭 毛，没有迁徙生长现象，呈点状生长。如果把它们接种于普通培养基，形态可以得 到恢复，说明细菌的遗传物质并未改变，属于表型变异。 2. 半乳糖苷酶基因的转导： 突变 遗传物质改变 转化 基因转移与重组 接合 普遍性转导 转导 局限性转导（复习前