PCR实验室操作规范.docx

PCR实验室操作规范 PCR检测技术是一种借助PCR扩增仪进行体外DNA高效复制的核酸扩增技术，其优势就是灵敏度极高，能准确快速判断样本中是否存在目标病原，但同时也存在气溶胶扩散、易污染实验环境的风险。为了有效避免污染，获得稳定可靠的检验结果，建议PCR实验检验人员按照以下要求规范操作： 1.严格控制进出实验室人员。实验无关人员不得随意进出实验室，有条件情况下要在各分区设置独立通道和进出整个实验区的门。 2.尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。 3.试剂准备区（配液区）是洁净级别要求最高的区域，最好在超净工作台中进行操作。分装反应液后，阴性对照最先加样，盖上管盖；阳性对照在完成样本加样后再加，动作应轻柔准确，防止高浓度的阳性对照核酸扩散。 4.扩增反应区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等。 5.各个实验区域根据需求配备专区专用仪器设备和耗材，如超净工作台、离心机、移液枪、枪头盒等，避免仪器设备及实验耗材交叉使用。 6.实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。移液器吸头、反应管等实验耗材应一次性使用。 7.实验的过程中选择最合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都必须更换手套，最好实验服、口罩、帽子也及时更换，以避免不同实验区交叉污染。 8.装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离心至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。 9.PCR检测试剂盒应低温冷冻保存，同时应与样品和PCR产物分开，不应放于同处。 10.应遵循实验室内部质量控制相关规定，实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照，全程质控实验过程，验证PCR反应的可靠性，并协助判断扩增系统的可信性。 11.每个检测结束后应及时对实验台面和地面进行清洁消毒（10%的次氯酸和75%酒精喷洒），然后紫外灯照射30分钟以上。 12．实验环境应尽可能通风，避免出现在密闭环境中长期进行PCR实验的情形。室内空调风向尽量从配液区到扩增反应区。实验室经常开窗换气，防止污染物在实验区蓄积。