组蛋白去乙酰化酶抑制剂与蛋白酶体抑制剂协同抑制乳腺癌细胞和分子机制研究.pdf

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与蛋白酶体抑制剂 协同抑制乳腺癌细胞及分子机制研究 中文摘要 目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂ＳＢＨＡ（Ｓｕｂｅｒｉｃ ｂｉｓｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ 及其与蛋白酶体抑制剂Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ或ＭＧ．１３２的协同作用，并进一步在ＭＣＦ０７细胞中 探讨ＳＢＨＡ单药及联合用药的分子机制。 方法：首先采用不同浓度梯度或不同时间梯度ＳＢＨＡ单药处理乳腺癌细胞株ＭＣＦ．７、 ＭＤＡ－ＭＢ．２３ １。采用ＷＳＴ方法和ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双染色流式细胞术检测经不同的ＳＢＨＡ 单药处理后ＭＣＦ．７、ＭＤＡ－ＭＢ．２３１的生长情况及凋亡率，同时在显微镜下观察细胞形态 变化并拍照。采用Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色，在荧光显微镜下观察细胞核形态变化。流式细胞 术分析ＳＢＨＡ单药处理后细胞周期变化。为了进一步研究ＳＢＨＡ与蛋白酶体抑制剂的联 平板集落形成法和ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双染色流式细胞术检测上述不同药物处理对ＭＣＦ．７、 ＭＤＡ．ＭＢ．２３１乳腺癌细胞增殖能力的影响和凋亡诱导的作用。同时我们分别采用琼脂糖 凝胶电泳和流式细胞术分析ＭＣＦ．７细胞经上述不同组处理后ＤＮＡ片段及细胞周期的变 化。然后，我们采用ＲＴ－ＰＣＲ及ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析上述不同组药物处理７２小时后ＭＣＦ．７ 结果：ＷＳＴ法和流式细胞术检测结果示ＳＢＨＡ单药对ＭＣＦ．７、ＭＤＡ－ＭＢ．２３１细胞均有 增殖抑制和凋亡诱导作用，且随着药物浓度增加和时间延长而增强，并引起细胞周期 Ｇｏ．Ｇｌ期阻滞。相差显微镜下见细胞形态发生明显变化，浆核比例缩小，荧光显微镜下 ３ 细胞的生长抑制及凋亡诱导作用明显增强，联合系数小于ｌ。琼脂糖凝胶电泳可见不同 Ｇ２．Ｍ期阻滞。采用ＳＢＨＡ单药稍升高ｐ２７ｍＲＮＡ水平，明显上调与细胞周期相关的ｐ２１、 ｍＲＮＡ表达 水平见升高，同样ｓｍａｄ 药明显上调Ｂｉｍ蛋白表达，联合用药后Ｂｉｍ表达水平较单药时下降。ＳＢＨＡ与 Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ／ＭＧ－１３２联合后上调ＪＮＫ及磷酸化ｃ－Ｊｕｎ蛋白水平的表达。 结论：ＳＢＨＡ单药能够以剂量依赖和时间依赖方式抑制人乳腺癌细胞ＭＣＦ０７和 ＭＤＡ－ＭＢ．２３ ＭＧ－１３２协同抑制ＭＣＦ．７和ＭＤＡ－ＭＢ－２３ １的生长并诱导凋亡，引起细胞周期Ｇ２．Ｍ期阻 （上调ＪＮＫ及磷酸化ｅ－Ｊｔｍ）诱导细胞凋亡。总之，在乳腺癌细胞中，ＳＢＨＡ单药或与 其他药物联合可能通过多种信号通路影响细胞周期进程，诱导细胞凋亡，从而抑制细胞 生长。 关键词：乳腺癌；Ｓｕｂｅｒｉｃ ｂｉｓｈｙｃｌｒｏｘａｍａｔｅ／Ｓｕｂｅｒｏｙｌｂｉｓｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ ＭＧ－１３２；凋亡 中图分类号：Ｒ７３７．９ ４ Ｈｉｓｔｏｎｅ ｗｉｔｈ Ｅｆｆｅｃｔｏｆ ＩｎｈｉｂｉｔｏｒＳＢＨＡ Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ＭＧ－１３２ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｂｒｅａｓｔ ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ ｏｒ ｏｎ Ｃｅｌｌｓ ＡＢＳＴＲＡＣＴ