饲料真蛋白质测定方法.pdf

饲料真蛋白质（TP）的测定方法 一、适用范围 本方法适用于饲料中真蛋白质的测定。 二、原理 蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于 热水，而非蛋白氮则易溶于水。用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用定 氮法测定，得出真蛋白质的含量，再用真蛋白质与粗蛋白质含量之比，可判断出饲料中是否 掺入水溶性非蛋白含氮物质。 三、仪器与设备 1、 实验室用样品粉碎机。 2、 分样筛：直径0.45mm （40 目）。 3、 分析天平：感量0.0001g。 4、 烧杯：200ml。 5、 玻璃棒。 6、 玻璃漏斗：直径10cm。 7、 定性滤纸：中速，直径15cm。 8、 表面皿：直径10 cm。 9、 干燥箱：可控温度65～70℃。 10、 消化管。 11、 消煮炉。 12、 半微量凯氏定氮仪或KDN-2C 型定氮仪 13、 容量瓶：100ml （半微量凯氏定氮仪用）。 14、 锥形瓶：150ml （半微量凯氏定氮仪用）。 15、 锥形瓶：250ml （KDN-2C 型定氮仪用）。 16、 酸式滴定管。 四、试剂与溶液 本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水均为蒸馏水。 1、 硫酸。 2、 硫酸铜溶液：60g/L。建议每次配制200～500ml 置试剂瓶中备用。 3、 混合催化剂：硫酸铜（5 个结晶水）：硫酸钾＝1：15 粉碎过40 目混匀。（同 粗蛋白质的测定） 4、 氢氧化钠：12.5g/L。建议每次配制200～00ml 置塑料瓶中备用。 5、 硼酸：20g/L。 6、混合指示剂：甲基红0.025 g/25mL 乙醇溶液；溴甲酚绿0.125 g/25mL 乙醇溶液。 两溶液等体积混合，在阴凉处保存期一个月。（同粗蛋白质的测定） 7、硼酸吸收液：按1000ml 浓度为20g/L 的硼酸溶液，加入6ml 的混合指示剂的比例混 合，现用现配。 8、盐酸标准溶液： （1）半微量凯氏定氮仪用：0.05mol/L 盐酸标准溶液：取4.2ml 浓盐酸，用蒸馏水定 容至1000 ml。标定后备用。 （2）KDN-2C 型定氮仪用：0.07mol/L 盐酸标准溶液：取6.0ml 浓盐酸，用蒸馏水定容 至1000 ml。标定后备用。（同粗蛋白质的测定） 1、氯化钡试液：50g/L。建议每次配制50ml 置滴瓶中备用。 五、试样的选取和制备 取具有代表性试样，用四分法缩减至50g，粉碎至40 目。 六、测定步骤 （一）样品的前处理： 精确称取样品 0.5g （KDN-2C 型定氮仪称取0.2g 左右），置于 200ml 烧杯中，加 50ml 水，盖上表面皿，在电炉上加热煮沸，取下，加入12.5ml 60g/L 硫酸铜溶液，再在搅拌下 缓缓加入12.5ml 12.5g/L 氢氧化钠溶液，摇匀，电炉上小火煮至沸腾后，取下，室温放置 2 小时。用滤纸在波纹漏斗上过滤，并用少量温水多次冲洗烧杯和沉淀物，直至洗出液无SO42- （检验方法：用表面皿接取滤液5 滴，加一滴氯化钡溶液，无白色沉淀），连漏斗一起放入 65～0℃烘箱烘约40 分钟至干燥，冷却。 同时做空白实验（与以上样品处理方法同）。 （二）样品的处理： 凯氏半微量定氮法： 1、试样的消煮：小心卷起滤纸呈棒状，连沉淀物一起移入预先加入6.4 g 混合催化剂 的消煮管中，再加入15ml 硫酸，将消煮管放入消煮炉中加热，温度控制在420℃，（注意观 察，若消煮液上喷，应停止加热，至消煮液回落再继续加热），当溶液呈透明的蓝绿色时， 再继续加热2.5 小时。 2、转移定容： 消煮完全后，将消煮管取出待消煮液完全呈淡蓝色时，先用蒸馏水少量多次冲洗弯颈漏 斗及消煮管口，用腕力摇动消煮管，然后倒入100ml 容量瓶内，用少量蒸馏水多次冲洗消煮 管及用于转移的漏斗内外壁，待冷却后，定容至刻度，作为试样分解液。 3、氨的蒸馏：半微量蒸馏法 将蒸汽发生器内加入2/3 位置蒸馏水及玻璃珠或炉渣、4ml 左右浓硫酸和几滴0.1%甲基 红指示剂，使呈红色，提供酸性环境。向反应室内注入适量蒸馏水，封闭反应室进液处和