微生物限度检查方法适用性验证方案.docx

专业资料 微生物限度检查法适用性试验案 验证案组织与实施 微生物限度检查法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小 组，参与实施。 案起草 部门/职务 签 名 日 期 质量管理部QC 案审核 部门/职务 名 日 期 质量管理部QC经理 案批准 部门/职务 批准人 批准日期 质量管理部质量总监 一、 概述 二、 验证目的和风险评估 三、 验证容 四、 法判定 五、 再验证期 六、 参考文献 七、 结果评价及结论 1、 概述： 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的法。检查项目包括需氧 菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母 菌计数法的适用性试验和控制菌检查法的适用性试验，以确认所采用的法适合于该产品的需氧菌、霉菌和 酵母菌数的测定和控制菌检查。 依照中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行法适用性试验。 2、 试验目的和风险评估： 验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数法及控制菌检查法适合我公司所生产产品的微生物限 度检查。 风险评估： 项目 潜在失效模式 失效影响 采取措施 未按案执行 试验部分项目出现偏差 和漂移 直接影响试验结果的 正确性 格执行经批准 的试验案 试验过程操作不当 未达到试验标准 试验失败 未格遵循试验案规 7E 3、验证容： 3.1、培养基来源: 品名 批号 规格 来源 确认人： 确认日期: 3.2、检查用培养基配制法: 培养基名称 配制法 PH7.0氯化钠-蛋白月东缓冲液 取本品14.63g，加水1000ml，加热溶解，分装，121C , 15分钟灭幽，备用。 胰酪大豆腺琼脂培养基 取本品40g,加水1000ml，加热溶解，分装，121C, 15分钟灭幽，备用。 胰酪大豆腺液体培养基 取本品30.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121C, 15分钟灭知 备用。 沙氏葡萄糖液体培养基 取本品30.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121C, 15分钟灭知 备用。 沙氏葡萄糖琼脂培养基 取本品65.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121C , 15分钟灭知 备用。 攵康凯琼月日拍乔至 取本品50.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121C, 15分钟灭知 备用。 攵康M液体拍乔至 取本品35.0,加水1000ml，加热溶解，分装，121C, 15分钟灭幽，备用。 确认人： 确认日期: 3.3、使用仪器 名称 型号 校验单位 有效期至 数显电热怛温培养 数显霉菌培乔箱 确认人： 确认日期: 3.4、验证试验用菌种: 菌种名称 代号 传代代数 来源 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 枯草芽抱杆菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 确认人： 确认日期: 3.5试验法: 取供试品10 ml加PH7.0氯化钠-蛋白月东缓冲液至100ml 1:10供试液。需氧菌、霉菌和酵母菌、控 制菌采用常规法。 3.6菌液的制备： 3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌的胰酪大豆腺琼脂斜面培物一伯金饵， 加入胰酪大豆月东液体培养基中置 30?35 C培养箱中培养18?24h ,取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌的胰酪大豆月东液体培养物 1ml加入9ml0.9 %无菌氯化钠溶液中， 制成10-1的菌 液，依法10倍稀释至10?7,分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆腺琼脂培养基 20ml ,各 菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于 100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。 3.6.2取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物， 加入沙氏葡萄糖液体培养基中置 20?25 C培养箱中培 养24?48h，取白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体培养物 1ml加入9ml0.9 %无菌氯化钠溶液中，制成 10-1的 菌液，依法10倍稀释至10?乙取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基 25ml ,各菌悬 液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于 100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。 3.6.3取黑曲霉的新鲜培养物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上， 20-25 C培养5-7天，加入3-5ml含0.05% 聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。取 1ml加入含0.05%聚山梨酯80的9ml 0.9%无菌 氯化钠溶液中，制成 10-1的菌液，依法10倍稀释至10~7,取，取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏 葡萄糖琼脂培养基 25ml，各菌悬液平行制备两个平皿， 平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml 的菌液备用。 3.7需氧菌、霉菌和酵母菌计数法适