快速学会做药敏试验.pdf

快速学会做药敏试验 一、药敏实验在临床诊断中应用意义： 1、在畜牧产业中，各种细菌性疾病很容易给养殖业造成经 济损失，使用抗生素防治细菌性疾病成为经常性工作。但在 养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗生素，造成细菌产生耐 药性问题正变得越来越突出，使抗菌药的疗效降低，疗程延 长，还使死亡率升高和治疗费用增加，给养殖业带来巨大经 济损失。 2 、耐药菌株还可能将耐药性基因由动物转移给人 类，对人类健康造成潜在威胁。如何避免滥用抗生素，药敏 试验在临床诊断中的应用就显得重要了。 3 、药敏实验可以 相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性，指导临 床合理用药、灵活选药。可以在本地区容易买到的药品中选 出最敏感的药物，既能缩短病程，又能避免盲目用药，减少 费用。 4 、因为药敏实验在动物体外进行，操作相对简单， 成本相对较低，既经济又快速有效，可以对流行病学调查进 行监控，控制和预防耐药菌株的流行，在生产中具有非常重 要现实意义。二、药敏试验的步骤： 1 、琼脂平板制备按照 营养琼脂干粉说明来进行稀释，稀释后琼脂放在微波炉里进 行加热， 加热后琼脂移至超净工作台中， 静置待温度降至 50℃ （手指能接受的最高温度） 左右时，开始倒平板， 内径 225px 平皿每个平皿倒入约 10ml 琼脂液，倒入后迅速混匀铺满平 皿底部。 2 、药液制备：按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置 按 1g 需加多少毫升水或配多少毫克饲料，就相当于配制药 液所加蒸馏水的毫升数。如 10g 药物可配 50kg 饲料，其换 算方法为： 1g 本品加 5000ml 蒸馏水。此溶液液即为用于做 药敏试验的药液。 3 、药敏纸片制备：要用质量较好的定性 滤纸，用普通的打孔器打成直径 6mm 的圆形小纸片。取圆 纸片 50 片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中，以单层牛皮纸 扎口或包扎。经 15 磅 15-20 分钟高压灭菌后，置于 37℃温 箱或烘箱中一天，使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为 0.01ml 计，在上述含有 50 片纸片的小瓶内加入药液 0.5ml ， 不时翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，一般浸泡 30 分钟即 可。 同时在记录药物名称， 于 37℃温箱过夜。 在温箱或烘箱 中的时间不宜过长，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素 宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮，置阴暗干 燥处或家用冰箱中保存，有效期 4-6 个月。 4 、病料接种取新鲜病料组织于超净工作台中或酒精灯旁， 剪取新鲜组织断面无菌涂抹到营养琼脂板上，涂布整个琼脂 平板表面，反复涂布几次，保证涂布均匀。 5 、贴药敏纸片 用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压，使纸片与培 养基表面完全接触。为了能准确观察结果，要求药敏纸片均 匀分布于培养基上，位置安排适中，防止出现抑制圈重叠。 一般各纸片中心相距应大于 24mm ，可在平皿中央贴一片， 外周等距离贴 7 －9 片。记住每种药敏纸片的名称。 6 、温箱培养贴完药敏纸片的平皿倒放在 37℃恒温箱中培养 24 小时以上。三、药敏实验结果观察 四、药敏实验选药原则 1 、在选择高敏药物时还应考虑药物 的吸收途径。因为药敏试验是药液直接和细菌接触，而在给 畜禽用药时，必须通过机体的吸收才能使药物发挥疗效，所 以在给畜禽用药时，高敏药物一定要配