基孔肯雅热实验室检测方案.pdf

基孔肯雅热实验室检测方案 基孔肯雅病毒（ Chikungunya Virus ，CHIKV）属于披膜病毒 科甲病毒属，病毒直径约 70nm，有包膜，含有 3 个结构蛋白 （衣壳蛋白 C、包膜蛋白 E1 和 E2）和 4 个非结构蛋白 （nsP1、 nsP2、nsP3 和 nsP4）。 CHIKV 的基因组为不分节段的正链 RNA，长度约为 11-12kb 。病毒基因组编码顺序为 5 ’－NS1－NS2－NS3－NS4 －C－E3－E2－E1－3 ’。通过病毒部分 E1 基因的系统发生分 析可将基孔肯雅病毒可分为 3 个组；第 1 组包含了全部西非 的分离株，第 2 组是亚洲分离株，东、中、南部非洲的分离 株构成了第 3 组。 CHIKV可在 Vero 、C6/36 、BHK-21 和 HeLa 等细胞中繁殖 并产生病变，并可感染除人外的灵长类、乳鼠等动物。 一、标本的采集和保存 （一）血清。 急性期血清：无菌采集静脉血 2～5ml （非抗凝血），一 般情况下，发病后 2 日内血清可用于病毒分离，发病后 5 日 内血清可用于 CHIKV核酸检测和血清学检测。 恢复期血清：静脉血 2～5ml （非抗凝血），无菌采集， 与急性期血清间隔时间为 2～3 周。 采血后，低温保存并尽快运送至实验室分离血清，以便 及时进行血清学或病原学检测。 第 1 页 共 1 页 不能及时检测的血清可置于 -70 ℃保存，尽量避免反复 冻融。 （二）伊蚊。 在本病暴发或流行期间，采集家庭内或外环境中伊蚊成 蚊、幼虫，用于病原学检测。 二、标本的运输 按照卫生部《人间传染的病原微生物名录》的规定， CHIKV 的危害程度属第二类病原微生物，血清和伊蚊标本应 采用 A 类包装（编号： UN 2814），干冰运输。 三、实验室特异性检测方法 目前，基孔肯雅热的实验室检测方法主要有 3 种：病毒 分离、核酸检测和血清学检测。 按照卫生部《人间传染的病原微生物名录》的规定，病 毒分离应在 BSL－3 级实验室中进行，灭活血清、伊蚊冻存 标本的核酸和血清学检测可在 BSL－2 级实验室中。 （一）血清学检测方法。 1．特异性 IgM 检测 目前较多采用的方法有： IgM 捕获 ELISA法（MacELISA）、 间接 ELISA 法和 IgM 捕获法胶体金标记（或其他标记）免疫 层析试纸条等。 一般情况下， IgM 抗体发病后 1 天开始出现，发病后 5 天多数患者呈阳性。 第 2 页 共 2 页 2 ．特异性 IgG 检测（急性期、恢复期双份血清） 目前较多采用的方法有：间接 ELISA 法、免疫荧光法和 胶体金标记（或其他标记）免疫层析试纸条等。