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小鼠植入前胚胎细胞获取时间
小鼠植入前胚胎细胞获取时间
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小鼠植入前胚胎细胞获取时间
雌性昆明白小鼠(合肥安徽医科大学实验动物中心), 4-5周龄。饲养温度24±2 ℃, 光照时间14 h (8:00–22:00), 自由采食, 饮水。适应3周后, 选取体重30±2 g的小鼠备用。当天17:00腹腔注射10 IU PMSG,48h后腹腔注射10 IU hCG。
将注射过hCG的雌鼠不与雄鼠合笼,15h后直接扎破壶腹部获取MII期卵子。
超排处理过的雌鼠按照1:1与成年健康的雄鼠合笼（假定受精时间是当晚12：00）。次日早上8:00检查阴道见栓情况,若见栓则假定该雌鼠受精。
体内组采用体内冲胚法分别在胚胎发育不同时期在输卵管和子宫的不同部位收集受精卵、2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚、囊胚各期胚胎（在腹腔注射hCG后22、41、60、67、76、101 h在输卵管的不同部位收集受精卵、2-细胞胚胎、4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚、囊胚）。
体外培养组在合笼见栓后, 在腹腔注射hCG后22h直接扎破壶腹部获取受精卵,取出受精卵,用无糖CZB培养液清洗后,转移至无糖CZB培养液中,37℃,5% CO 2的培养箱中进行培养。56 h后, 4-细胞胚胎转移至有糖CZB培养液中,37℃,5% CO 2的培养箱中进行培养,收集体外2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚、囊胚（在腹腔注射hCG后22、41、63、71、77、101 h体外直接收集）。
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