新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒全预混冻干多重荧光PCR检测试剂盒及其检测方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112760415 A (43)申请公布日 2021.05.07 (21)申请号 202011571695.0 (22)申请日 2020.12.27 (71)申请人 青岛巴特菲科技发展有限公司 地址 266000 山东省青岛市高新区河东路 368号蓝色生物医药产业园5号楼101 室 (72)发明人 李然栋　马清霞　薄慧文　 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/686 (2018.01) C12N 15/11 (2006.01) 权利要求书2页 说明书9页 附图1页 (54)发明名称 新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒全预混 冻干多重荧光PCR检测试剂盒及其检测方法 (57)摘要 本发明公开了新型冠状病毒、甲型流感病 毒、乙型流感病毒的多重荧光PCR快速检测试剂 盒，包括冻干固态RT‑PCR Mix，液态复溶Buffer、 冻干固态阳性对照、冻干固态阴性对照，所述冻 干固态RT‑PCR Mix含有SARS‑CoV‑2特异性基因 ORF1ab、甲型流感M基因、乙型流感M基因和人源 内参基因RNAse P引物序列对应的引物组，本试 剂盒将多重荧光定量PCR技术和冷冻干燥工艺相 结合，利用3对特殊引物和人源内参基因，体外扩 增3种病原体的特异性序列，并结合荧光探针进 行实时检测。并且该检测方法操作简便，对检测 A 人员的操作水平要求低，可一次性检测3种常见 5 的呼吸道病原体，大大节约检测时间和检测成 1 4 0 本，实现大批量样本的快速筛选，全程检测仅需 6 7 2 40分钟‑1小时，结果准确可靠。 1 1 N C CN 112760415 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒的三重荧光PCR快速检测试剂盒，其特征在于： 包括冻干固态RT‑PCR Mix，液态复溶Buffer、冻干固态阳性对照、冻干固态阴性对照和病毒 RNA提取试剂，所述冻干固态RT‑PCR Mix含有SARS‑CoV‑2特异性N gene、甲型流感M基因、乙 型流感M基因和人源内参基因RNAse P引物序列对应的引物组。 2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒的三重荧光PCR快速检测 试剂盒，其特征在于：所述引物组为四组引物和探针，所述引物和探针的序列如下表： 3.根据权利要求2所述的新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒的三重荧光PCR快速检测 试剂盒，其特征在于：所述第一组合中的引物为第1引物组，所述第1引物组用于检测SARS‑ CoV‑2；所述第二组合中的引物为第2引物组，所述第2引物组用于检测甲型流感病毒；所述 第三组合中的引物为第3引物组，所述第3引物组用于检测乙型流感病毒；所述第四组合中 的引物为第4引物组，所述第4引物组用于检测内标基因RNaseP。 4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒的三重荧光PCR快速检测 试剂盒，其特征在于：所述冻干固态RT‑PCR Mix在冻干前全预混混合液中含有dATP、dGTP、 dCTP、dUTP、Taq DNA聚合酶、MMLV逆转录酶、RNase抑制剂、UDG酶、N基因‑F/R/P、InfA M基 因‑F1/F2、InfA M基因‑R1、InfA M基因R2、InfA M基因P、InfB M基因‑F/R/P、RNase P‑F/R/ P以及含3％～6％海藻糖(w/v)、0.01％～0.1％甘氨酸(w/v)、0.1％～1％牛血清白蛋白(w/ v)、1mmol/L‑5mmol/L DTT、0.1‑0.3％Proclin 300、0.1‑1％甲酰胺的冻干复合保护剂。 5.根据权利要