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优秀医学课件10PCR试剂与耗材选择及质检 - 刘晓春.pptx

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PCR试剂及耗材的验证与 质检;提纲;概念;试剂的验证;什么时候进行性能验证;如何进行试剂的性能验证;(2)最低检测限和定量限的验证;2.线性范围;3.准确度;4.精密度;(3)用于精密度评价四个水平:;5.不同基因型的验证 以HBV为例:;6.分析特异性;用于交叉反应研究的微生物(推荐);干扰物质,以HBV为例 ①潜在的干扰物质主要包括:内源性物质和常用的治疗 药物如普通IFNα(2a、2b和1b)和聚乙二醇干扰素 α(2a和2b)[PegIFNα(2a和2b)]、拉米夫定 (lamivudine)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxil)、恩替卡韦(entecavir)、替比夫定 (telbivudine)等。;用于干扰研究的物质(推荐);7.溯源性;9. 试剂稳定性的评估;PCR或RT-PCR试剂盒的组成;核酸提取方法;(一)核酸提取方法;(二)核酸扩增所需的原材料;1.寡核苷酸引物和探针;长度:20bp左右,太短有错配,太长易形成稳定的集 合体; G+C比例:45%~55%; 一条引物内或一对引物间不应有5个以上互补核苷酸 ,以免形成引物二聚体; 浓度:过高可致异位引导,非靶序列扩增,过低则影 响PCR产率; 扩增区域:应为病原体基因最保守的区域。;2.扩增缓冲液和dNTP;3.Taq酶以及反转录酶 酶的浓度 浓度过高导致非靶序列扩增;过低影响PCR产量。;4、核酸扩增方法;循环次数:;5. 产物检测;常规 PCR的检测结果;二、影响PCR试剂盒质量的因素;试剂盒的运输和贮存;三、 临床PCR试剂盒的分类 临床PCR试剂盒按其测定靶核酸可分为RNA测定和DNA 测定两大类;;四、临床PCR试剂盒的选用原则;五、临床PCR试剂盒的质检;(一)内、外包装的质检;(二)试剂盒测定性能的质检;表 试剂盒评价四格表;各项指标的计算公式如下:;弱阳性(低拷贝数)质控物进行质检。 在每次临床检测中,同时带上弱阳性质控物与临床标 本一起检测,对判断试剂盒的质量及其稳定性具有重 要的参考价值。;耗材的质检;谢谢聆听

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