诱变育种流程及紫外诱变育种的详细步骤.pdf

1. 首先是天然菌种的选育： 调查研究及查阅充分的资料 ↓ 设计实验方案 ↓确定采集样品的生态环境 采样 ↓确定特定的增殖条件 增殖培养 确定特殊的选择培养基及可能的 定性或半定量快速检出法 平板分离 ↓ 原种斜面 ↓确定发酵培养基础条件 筛选 ↓ 初筛（ 1 株 1 瓶） ↓ 复筛（ 1 株 3～5 瓶） ↓结合初步工艺条件摸索 再复筛（ 1 株 3～5 瓶） ↓ 3 ～5 株 ↓ 单株纯种分离 生产性能试验 →毒性试验 菌种鉴定 2. 诱变菌种： 出发菌株 菌种纯化 ( 出发菌株性能测定 ) 制备斜面孢子 制备单孢子悬液 ( 悬液进行活菌计数 ) 诱变剂处理 ( 存活菌数 的测定并计算存活率 ) 平板分离 ( 测定变异率 ) 挑取变异菌落 并移植至斜面上 初筛 ( 初筛数据分析， 生产性状的粗测 ) 斜面 传代 复筛 ( 复筛数据分析，精确测定生产性状 ) 变异菌株 ( 菌 株参数分析 ) 小型或中型投产试验 大型投产试验。 诱变育种应把握的主要原则有以下几点： 1) 选择简便有效的诱变 剂。在选用理化因素作诱变剂时，在同样效果下，应选用最简便的因 素；在同样简便的条件下， 应选用最高效的因素。 2) 挑选优良的出发 菌株。最好采用生产上已发生自变的菌株， 选用对诱变剂敏感的菌株， 选取有利于进一步研究或应用性状的菌株。 4) 处理单细胞或孢子悬 液。单细胞悬液应均匀而分散，孢子、芽孢等应稍加萌发。 5) 选用合 适的诱变剂量。 一般正变较多出现在低剂量中， 负变较多地出现在高 剂量中。 6) 选用高效的筛选方法。 紫外线诱变育种 ： 紫外线诱变一般采用 15W紫外线杀菌灯，波长为 253-265nm．灯 与处理物的距离为 30cm，照射时间依菌种而异，一般为几秒至几十 分钟。一般我们常以细胞的死亡率表示， 希望照射的剂量死亡率控制 在 70～80%为宜。 被照射的菌悬液细胞数，细菌为 106 个/ml 左右，霉菌孢子和酵 母细胞为 106～ 107 个 /ml 。由于紫外线穿透力不强，要求照射液不 要太深，约～厚，同时要用电磁搅拌器或手工进行搅拌， 使照射均匀。 由于紫外线照射后有光复活效应，所以照射时和照射后的处理应 在红灯下进行。 具体操作步骤 1 ．将细菌培养液以 3000r ／min 离心 5min，倾去上清液，将菌 体打散加入无菌生理盐水再离心洗涤。 2 ．将菌悬液放入一已灭菌的， 装有玻璃珠的三角瓶内用手摇动， 以打散菌体。 将菌液倒入有定性滤纸的漏斗内过滤， 单细胞滤液装入 试管内，一般处于浑浊态的细胞液含细胞数可达 108 个／ ml 左右， 作为待处理菌悬液