C-重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制技术评价一般原则 20070823.doc

精品资料 精品资料 PAGE / NUMPAGES 精品资料 重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制 技术评价一般原则 二OO六年十月 目 录 1前言 1.1 目的和意义 1 1 2 1.2 适用范围 1.3 局限性 2 宿主细胞的选择 2.1 宿主细胞来源、历史和一般特性 2.1.1 宿主细胞来源和历史 2.1.2 宿主细胞一般特性 3 重组工程细胞克隆构建过程、筛选及鉴定 3.1 目的基因来源 3.2 表达载体的具体构建步骤 3.3 载体引入宿主细胞的方法及重组工程细胞的筛选 3.4 重组工程细胞的初步鉴定 4 重组工程细胞库的建立 4.1 细胞库建立 3 4.2 建库细胞的管理 5 细胞库检定 3 5.1 细胞鉴定 5.1.1 细胞种属的鉴定 5.1.2 致瘤性试验 5.1.3 目的基因和表达框架分析 5.1.4 表达产物检测 5.2 微生物污染检测 5.2.1 细菌、真菌和支原体检查 5.2.2 病毒因子的检查 5.2.2.1 体外试验 5.2.2.2 体内试验 5.2.2.3种属特异性病毒的检定 5.2.2.4 逆转录病毒的检测 5.2.2.4.1 感染性试验 5.2.2.4.2 逆转录酶检测 5.2.2.4.3 透射电镜检查 6 细胞稳定性研究 6 6.1 贮存条件下的稳定性 6.2 传代/扩增过程中的稳定性 6.2.1 基因水平的比较 6.2.2 目的产物表达水平的比较 6.2.3 细胞自身的稳定性 6.2.4 内源因子检查 6.2.5 致瘤性监测 7 生产过程细胞质量控制 7.1 常规生产过程监控 7.2 细胞增殖限度 7 8 7.3 其它风险性因素控制 8小结 9、名词解释 10、参考文献 9 10 1前言 对于结构复杂、带有糖基化修饰基团的抗体、凝血因子、酶、激素等 生物大分子，通常需要借助哺乳动物细胞才能正确表达和修饰成具有预期 生物活性的重组制品。随着生物工程技术的进步和发展，目前这些细胞应 用不断增多。 在宿主细胞选择、重组工程细胞构建以及生产细胞的培养扩增和监控 过程中，不仅要关注细胞的适用性、目的产物表达生产能力，同时还应当 重视伴随细胞培养产生的内源性病毒、宿主细胞残余蛋白和 DNA、致肿瘤 成分等潜在的风险性因素对重组产品带来的安全性影响，在早期研究阶 段，同步开展库细胞、生产培养过程细胞、生产终末细胞的全面检定和控 制以及病毒和/或致瘤性成分的去除/灭活工艺的验证。 1.1 目的和意义 经过全面检测的种子细胞是实现重组基因工程产品生产的前提和基 础，使生产用种子细胞具有共同的始祖细胞，保持相同的遗传和生物学特 征，在特定的培养环境和条件下持续稳定表达携带的外源目的基因；经过 研究确定细胞在扩增培养和生产过程中的变化，才能够有效控制风险性因 素，满足生产的持续需求，使产品质量保持一致。 本技术评价一般原则重在阐述重组制品生产用哺乳动物细胞质量控 制的基本内容和相关要求，以期引导开展全面完整的细胞质量试验研究、 生产细胞培养工艺验证，建立系统规范的重组工程细胞库及实现生产过程 细胞质量的有效监控。 1.2 适用范围 本技术评价一般原则仅适用于生产前述的抗体等治疗用重组制品的 哺乳动物细胞，不包括细菌、酵母等重组工程菌，也不包括治疗用体细胞、 疫苗生产用细胞基质、杂交瘤细胞等。相关内容可参见国家局已颁布的指 导原则和药品审评中心公布的药品技术评价一般原则。重组制品生产用哺 乳动物细胞亦须符合这些已有文件的相关要求。 1.3 局限性 本技术评价一般原则主要结合目前对于重组工程细胞结构、功能，细 胞致瘤性和内源性病毒对重组产品带来的风险及微生物污染因子的危害 性共识，提出技术审评关注的重点问题和基本原则，需要结合具体细胞和 实际培养控制条件考虑和选择。 2 宿主细胞的选择 应选择来源、背景十分清楚的适宜宿主细胞，明确存在的内源性病毒 和/或致瘤性等影响制品安全性的因素，并结合制品纯化的程度、细胞培 养和生产过程中风险性成分的去除/灭活能力及残留量控制水平，以及临 床应用适应症和用法用量等特点综合分析，经利弊权衡后确定与特定制品 相适应的宿主细胞。尽可能选择致瘤性试验阴性和低增殖代次水平的宿主 细胞。 对于改良的传代细胞、全新构建的转化细胞，甚至肿瘤细胞等，由于 前期研究、背景资料和致瘤性风险等积累的认识十分有限，其开发应用将 引入新的安全性